Anticorpo policlonale rabbit Anti-PKACα per WB e ELISA - P17612

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PKACα

• PKACα (PRKACA) è la subunità catalitica alfa della proteina chinasi dipendente da cAMP. Esistono due isoforme: l'isoforma 1, ubiquitaria, e l'isoforma 2 specifica dello sperma, arricchita negli spermatociti in pachitene.
• Phosphoryla numerosi substrati citoplasmatici e nucleari, tra cui CDC25B, ABL1, NFKB1, istone H1.4 e VASP, regolando il ciclo cellulare, la trascrizione e la motilità cellulare. Riferimenti correlati: PMID:15642694, PMID:15905176, PMID:16387847
• Nelle piastrine, PKACα forma un complesso con NF-κB e IκBα per mantenere la quiescenza; la stimolazione con agonisti dissocia il complesso, liberando PKACα che phosphoryla VASP e promuove l'aggregazione. Riferimenti correlati: PMID:15642694, PMID:20356841
• PKACα inibisce la segnalazione di Smoothened phosphorylando i fattori di trascrizione GLI (GLI1/2/3), innescando la loro lavorazione e bloccando l'espressione genica dei geni bersaglio in assenza di ligandi hedgehog. Riferimenti correlati: PMID:16705181
• Il sequestro di PKACα da parte del recettore Smoothened sulla membrana cellulare previene la phosphorylazione di GLI, permettendo l'attivazione della via di segnalazione. Riferimenti correlati: PMID:36202993, PMID:39138140
• PKACα potenzia l'attività del canale del calcio RYR2, alterando la dinamica del rilascio di calcio e contribuendo al rilascio di Ca²⁺ indotto da sovraccarico delle riserve. Riferimenti correlati: PMID:17693412
• Regola negativamente mTORC1 phosphorylando RPTOR, collegando la segnalazione cAMP alla rilevazione dei nutrienti. Riferimenti correlati: PMID:31112131
• Subcellularmente, PKACα si trova nel citoplasma, nel nucleo, sulla membrana cellulare, nei mitocondri e nelle proiezioni cellulari (cilia/flagelli), riflettendo le sue funzioni multifettate.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde a una regione conservata (amminoacidi 251-351) all'interno del dominio catalitico; è possibile una reattività incrociata con altre subunità catalitiche della PKA (PRKACB, PRKACG), pertanto verificare la specificità nel proprio sistema sperimentale.
• Nel Western blot, è attesa una banda principale di ~39–40 kDa; bande aggiuntive possono rappresentare isoforme o prodotti di degradazione. Utilizzare controlli positivi e negativi appropriati.
• Per l'ELISA, titrare sia l'antigene di rivestimento sia l'anticorpo per ottimizzare il rapporto segnale/rumore; considerare l'utilizzo di un frammento ricombinante di PKACα come standard.
• Data il suo ruolo in molteplici vie di segnalazione, se si studia il contesto delle interazioni dipendenti dalla phosphorylazione, trattare i campioni con inibitori di fosfatasi per preservare tali interazioni.

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