PolymAb® coniglio anti-PKC alpha per WB e ELISA - P17252

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PKC alpha

• La proteina chinasi C alfa tipo (PKCα) è una serina/treonina-proteina chinasi calcio-dipendente, dipendente da fosfolipidi e diacilglicerolo (DAG), codificata dal gene PRKCA. Appartiene alla famiglia delle proteine chinasi C e contiene domini regolatori a dito di zinco e un dominio catalitico chinasi.
• Nella biologia del cancro, PKCα è altamente espressa in gliomi e tumori della mammella, dove agisce come promotore tumorale e contribuisce ai fenotipi maligni regolando proliferazione cellulare, apoptosi e migrazione attraverso vie come la MAPK/ERK.
• PKCα svolge ruoli cardiovascolari critici: modula negativamente la contrattilità miocardica fosforilando la troponina T cardiaca (TNNT2), promuove l'ipertrofia cardiaca tramite la segnalazione ERK1/2 ed è necessaria per l'ipertrofia dei cardiomiociti dopo stimolazione con PMA.
• Nell'angiogenesi e nella funzione piastrinica, PKCα media la proliferazione delle cellule endoteliali indotta da VEGFA e la formazione di tubi, e attiva l'integrina piastrinica αIIbβ3 attraverso la via RAP1GAP, facilitando l'aggregazione piastrinica indotta dal calcio e la formazione di trombi.
• PKCα fosforila substrati chiave a valle: fosforila il fattore di scambio guanidico DOCK8 per CDC42 per aumentare l'attività di CDC42 durante la migrazione dei linfociti T, fosforila KLHL3 per ridurre la sua interazione con WNK4 in risposta all'angiotensina II e attiva LRRK1 coinvolto nel traffico intracellulare mediato da RAB. Riferimenti correlati: PMID:28028151 PMID:25313067 PMID:36040231
• Subcellulare, PKCα si localizza dinamicamente nel citoplasma, sulla membrana cellulare, sulla membrana mitocondriale e nel nucleo, traslocando tra i compartimenti in risposta a stimoli. Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione e acetilazione.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Per il Western blotting, si consiglia di utilizzare controlli positivi come lisati cellulari di HeLa, MCF-7 o A431, che esprimono PKCα endogena. Un intervallo di diluizione iniziale deve essere determinato empiricamente.
• Poiché l'immunogeno è la proteina PKCα umana ricombinante e la reattività crociata con topo e ratto è riportata, validare l'anticorpo nel sistema di campioni pertinente per confermare la rilevazione specie-specifica.
• Per applicazioni ELISA, valutare l'accoppiamento con un anticorpo di cattura appropriato e ottimizzare le condizioni di analisi; la proteina PKCα ricombinante può essere utilizzata come standard.
• I cambiamenti conformazionali dipendenti dalla fosforilazione possono influenzare il legame dell'anticorpo; se si studia PKCα attivata, considerare il pretrattamento con forbol esteri (es. PMA) o altri stimoli nei saggi cellulari.

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