Anticorpo monoclonale anti-PKC zeta per WB, ELISA - Q05513

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della PKC zeta

• La protein chinasi C zeta (PKC zeta, PRKCZ) è un'isoforma atipica della protein chinasi C (aPKC) indipendente dal calcio e dal diacilglicerolo, appartenente alla famiglia delle chinasi della serina/treonina. È codificata dal gene PRKCZ e svolge ruoli fondamentali nelle vie di trasduzione del segnale che regolano la crescita cellulare, la sopravvivenza e l'infiammazione.
• La PKC zeta agisce a valle della fosfatidilinositolo 3-chinasi (PI3K) e partecipa alla cascata delle chinasi proteiche attivate dai mitogeni (MAP). Media la segnalazione dell'insulina e contribuisce al trasporto del glucosio attraverso la traslocazione di SLC2A4/GLUT4 negli adipociti, attivando inoltre la segnalazione MAP2K1/MEK1-MAPK1/ERK2 indipendentemente da RAF1 in seguito a stimoli mitogenici.
• Un ruolo chiave della PKC zeta riguarda l'attivazione del fattore di trascrizione NF-kappa-B. Attraverso l'interazione con SQSTM1/p62 e adattatori come RIPK1 e TRAF6, fosforila e attiva la chinasi IKBKB, determinando la degradazione degli inibitori di NF-kappa-B e promuovendo l'espressione dei geni infiammatori. Inoltre, fosforila la subunità RELA in Ser-311, alleviando la repressione mediata da SETD6.
• La PKC zeta è coinvolta nella definizione della polarità cellulare. Negli astrociti in migrazione, forma un complesso con PARD6A e viene reclutata da CDC42 per coordinare la funzione dei motori dei microtubuli e della dineina. Questa funzione di polarità è essenziale per la migrazione cellulare direzionata e la divisione cellulare asimmetrica.
• Nel contesto neuronale, la PKC zeta si associa a FEZ1 per stimolare la differenziazione neuronale nelle cellule PC12 ed è necessaria per la fase tardiva del potenziamento a lungo termine (LTP) nelle cellule CA1 dell'ippocampo e per il mantenimento della memoria a lungo termine.
• La PKC zeta fosforila diversi substrati: fosforila VAMP2 in vitro e fosforila e attiva anche LRRK1, che successivamente fosforila le proteine RAB coinvolte nel traffico intracellulare. Riferimenti correlati: PMID:17313651 PMID:36040231
• A livello subcellulare, la PKC zeta si trova nel citoplasma, negli endosomi, nelle giunzioni cellulari e nella membrana, in accordo con il suo ruolo nella segnalazione e nel traffico intracellulare. È espressa ampiamente, con i livelli più elevati nel cervello e livelli inferiori nei polmoni, nei reni e nei testicoli.
• La proteina è soggetta all'utilizzo alternativo del promotore e allo splicing alternativo, che determinano la formazione di isoforme. Contiene un dominio di legame all'ATP, un dito di zinco (di tipo estere del forbolo/DAG) e molteplici siti di fosforilazione. Il suo peso molecolare è di circa 67,7 kDa, ma le bande osservate a 46 kDa, 56 kDa e 67 kDa probabilmente corrispondono a isoforme o modifiche post-traduzionali.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è una proteina di fusione ricombinante corrispondente ai 100 amminoacidi N-terminali della PKC zeta umana (NP_002735.3). Durante l'esecuzione del western blot (WB), considerare che più isoforme o modifiche post-traduzionali possono generare bande a 46 kDa, 56 kDa o 67 kDa; verificare il peso molecolare osservato nel tipo di campione in esame.
• Per le applicazioni ELISA, assicurarsi che l'anticorpo riconosca la conformazione nativa o gli epitopi lineari, secondo necessità; eseguire esperimenti di titolazione per ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo.
• Poiché l'anticorpo è reattivo con la PKC zeta umana, è adatto a campioni di origine umana. Non è riportata la reattività crociata con altre specie; pertanto, si raccomanda la validazione in caso di utilizzo con sistemi non umani.
• L'anticorpo viene fornito in forma liquida con spedizione in borsa refrigerante; al ricevimento, aliquotarlo e conservarlo alle temperature appropriate per mantenerne la stabilità.

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