Anticorpo policlonale di coniglio anti-PKM1/2 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P14618

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di PKM1/2

• Catalizza la fase finale e limitante della velocità della glicolisi trasferendo un gruppo fosforile dal fosfoenolpiruvato (PEP) all'ADP, generando ATP.
  Riferimenti correlati:
  PMID:15996096 | PMID:1854723 | PMID:20847263
• Il rapporto tra la forma tetramerica altamente attiva e la forma dimerica quasi inattiva determina se i carboni del glucosio vengono indirizzati verso i processi biosintetici o utilizzati per la produzione di ATP glicolitico, un interruttore fondamentale per la proliferazione e la sopravvivenza delle cellule tumorali.
  Riferimenti correlati:
  PMID:15996096 | PMID:1854723 | PMID:20847263
• L'isoforma M2 (PKM2), predominante durante l'embriogenesi e nei tumori, presenta una bassa attività basale della piruvato chinasi e richiede l'attivazione allosterica da parte del D-fruttosio 1,6-bisfosfato. Oltre al suo ruolo metabolico, PKM2 trasloca nel nucleo in risposta a segnali, dove agisce come protein chinasi, fosforilando STAT3 in Tyr-705 e l'istone H3 in Thr-11 per promuovere la trascrizione di geni quali VEGFA e CD274, favorendo l'angiogenesi e l'evasione immunitaria.
  Riferimenti correlati:
  PMID:18337823 | PMID:20847263 | PMID:18191611 | PMID:21620138 | PMID:22056988 | PMID:22306293 | PMID:22901803 | PMID:24120661 | PMID:33314660 | PMID:26787900
• L'isoforma M1 (PKM1), espressa nei tessuti adulti, presenta un'elevata attività costitutiva della piruvato chinasi, indipendente dagli attivatori allosterici, sostituendo funzionalmente M2 dopo la nascita.
  Riferimenti correlati:
  PMID:18337823 | PMID:20847263
• La localizzazione subcellulare è dinamica: PKM1/2 risiede prevalentemente nel citoplasma, ma, nel caso di PKM2, diversi stimoli come l'EGF ne inducono la traslocazione nucleare, dove l'omodimerizzazione consente le sue funzioni di protein chinasi.
  Riferimenti correlati:
  PMID:22056988 | PMID:22306293 | PMID:22901803
• Specificità tissutale: PKM2 è specificamente arricchita nelle cellule proliferanti, comprese le cellule staminali embrionali e le cellule tumorali, mentre PKM1 è presente in molti tessuti adulti ma è notevolmente assente nelle cellule tumorali.
  Riferimenti correlati:
  PMID:18337823
• Le modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione, fosforilazione, idrossilazione e ubiquitinazione, modulano finemente l'attività, la stabilità e il traffico subcellulare di PKM1/2, evidenziandone il ruolo di centro regolatore nel metabolismo e nella segnalazione.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende i residui 11–221 di PKM1/2 (NP_001193728.1), una regione conservata tra PKM1 e PKM2; i ricercatori dovrebbero verificare la specificità dell'isoforma nel proprio sistema sperimentale.
• Per il Western blot (WB), è prevista una banda intorno a 58 kDa. Includere lisati di controllo positivi e negativi appropriati (ad es. tessuto tumorale rispetto a tessuto normale) per confermare la reattività.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), si raccomanda di ottimizzare il recupero dell'antigene e la diluizione dell'anticorpo per sezioni fissate in formalina e incluse in paraffina.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), ottimizzare la fissazione e la permeabilizzazione per preservare la localizzazione citoplasmatica/nucleare duale di PKM2 in presenza di stimoli specifici.
• Nelle applicazioni ELISA, determinare empiricamente la concentrazione ottimale dell'anticorpo e le condizioni di rivestimento utilizzando protocolli indiretti standard o protocolli sandwich.

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