Anticorpo Monoclonale Anti-PKM2 per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P14618

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del PKM2

• Il PKM2 catalizza il tappa limitante finale della glicolisi trasferendo un gruppo fosforile dal fosfoenolpiruvato (PEP) all'ADP, generando ATP. L'attività dell'enzima è regolata da un equilibrio dinamico tra un tetramero altamente attivo e un dimero quasi inattivo, determinando il destino dei carboni del glucosio verso la produzione di energia o la biosintesi. Riferimenti correlati: PMID:15996096 PMID:1854723 PMID:20847263
• Il gene PKM genera due isoforme principali tramite splicing alternativo: l'isoforma adulta M1 (PKM1) e l'isoforma embrionale M2 (PKM2). Il PKM2 possiede una bassa attività intrinseca di piruvato chinasi e richiede l'attivazione allosterica da parte del D-fruttosio 1,6-bisfosfato (FBP), mentre il PKM1 è costitutivamente attivo. Riferimenti correlati: PMID:18337823 PMID:20847263
• Oltre al suo ruolo metabolico citoplasmatico, il PKM2 funge da proteina chinasi nucleare. A seguito di stimoli come l'attivazione del recettore EGF, il PKM2 transloca nel nucleo e fosforila bersagli tra cui STAT3 a Tyr-705 e l'istone H3 a Thr-11, promuovendo la trascrizione di geni coinvolti nella proliferazione cellulare, nell'angiogenesi (es. VEGFA) e nella tumorigenesi. Riferimenti correlati: PMID:18191611 PMID:21620138 PMID:22056988 PMID:22306293 PMID:22901803 PMID:24120661 PMID:33314660 PMID:26787900 PMID:17308100
• Il PKM2 è espresso prevalentemente in cellule altamente proliferative, incluse le cellule staminali embrionali, le cellule del carcinoma embrionale e le cellule cancerose, rendendolo un noto marcatore tumorale. L'isoforma adulta PKM1 è espressa nei tessuti adulti normali ed è generalmente assente nei tumori. Riferimenti correlati: PMID:18337823
• Il PKM2 si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo. La sua translocazione nucleare è indotta da varie vie di segnalazione ed è critica per le sue funzioni oncogeniche non metaboliche.
• Le modificazioni post-traduzionali come acetilazione, fosforilazione, idrossilazione e metilazione regolano strettamente l'attività metabolica del PKM2, la stabilità proteica e l'importazione nucleare, collegando lo stato metabolico cellulare alle reti di segnalazione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 380–480 del PKM2 umano (NP_002649.3), situato all'interno della regione C-terminale unica che distingue il PKM2 dall'isoforma M1. Questo design suggerisce un'elevata specificità per il PKM2 rispetto al PKM1.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto del PKM2 è di circa 58 kDa. Validare le prestazioni dell'anticorpo utilizzando controlli positivi appropriati (es. linee cellulari di cancro umano) e considerare l'ottimizzazione della diluizione dell'anticorpo primario e dei tempi di esposizione.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), testare diversi protocolli di fissazione e permeabilizzazione per preservare la localizzazione del PKM2, poiché può essere sia citoplasmatica che nucleare.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), utilizzare condizioni di lisi nativa per mantenere i complessi proteici e confermare l'efficienza di cattura del bersaglio.
• Quando si esegue un ELISA, stabilire curve standard con la proteina ricombinante PKM2 e validare sensibilità e specificità nella matrice di campione pertinente.
• È indicata la reattività incrociata con PKM2 di topo e ratto; verificare il riconoscimento del bersaglio nel sistema sperimentale specifico utilizzando controlli specifici per la specie.

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