Anticorpo policlonale coniglio anti-PKM2 specifico per WB, IF/ICC, ELISA - P14618

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PKM2

• PKM2 catalizza l'ultimo passaggio limitante della velocità della glicolisi, convertendo il fosfoenolpiruvato in piruvato con produzione di ATP, e il suo rapporto tetramero-dimero controlla l'interruttore tra la produzione di energia e la fornitura di precursori biosintetici critici per la sopravvivenza delle cellule tumorali.
  Riferimenti correlati: PMID:15996096, PMID:1854723, PMID:20847263
• PKM2 è l'isoforma embrionale con bassa attività costitutiva di piruvato chinasi, che richiede l'attivazione allosterica da parte del D-fruttosio-1,6-bisfosfato (FBP); viene sostituita dall'isoforma ad alta attività PKM1 nella maggior parte dei tessuti adulti.
  Riferimenti correlati: PMID:18337823, PMID:20847263
• Nel nucleo, PKM2 funge da proteina chinasi, fosforilando STAT3 a Tyr-705 e l'istona H3 a Thr-11 per guidare la trascrizione di geni come VEGFA e CD274, collegando il metabolismo all'espressione genica.
  Riferimenti correlati: PMID:18191611, PMID:21620138, PMID:22056988, PMID:22306293, PMID:22901803, PMID:24120661, PMID:33314660
• PKM2 promuove la tumorigenesi attraverso la co-attivazione trascrizionale con NF-κB e FOXM1, e partecipa anche a vie di morte cellulare indipendenti dalla caspasi.
  Riferimenti correlati: PMID:17308100, PMID:26787900, PMID:33314660
• PKM2 subisce diverse modificazioni post-traduzionali—acetilazione, fosforilazione, metilazione, idrossilazione, S-nitrosilazione e ubiquitinazione—che regolano le sue attività metaboliche e non metaboliche.
• Agisce anche come proteina citosolica legante gli ormoni tiroidei (CTHBP) e proteina interagente con Opa (OIP-3), riflettendo ruoli multifunzionali oltre la glicolisi.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno si trova all'interno degli aminoacidi 380–480 del PKM2 umano, una regione che potrebbe differenziarlo dalla variante di splicing PKM1; includere controlli PKM1 quando si valuta la specificità dell'isoforma.
• Per il Western blot, prevedere una banda a ~58kDa; utilizzare lisati da linee cellulari cancerogene umane, murine o ratte (es. HeLa, MCF-7) e includere controlli positivi e negativi.
• Nell'immunofluorescenza o ICC, prevedere sia colorazione citoplasmica che nucleare; ottimizzare i protocolli di fissazione e permeabilizzazione per preservare gli epitopi in entrambi i compartimenti.
• Per le applicazioni ELISA, l'immunogeno peptide sintetico può fungere da controllo positivo; considerare l'abbinamento con un anticorpo di rilevamento che riconosce un epitopo distinto per i saggi a sandwich.

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