Anticorpo policlonale coniglio anti-PLK1 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P53350

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della PLK1

• Serina/treonina proteina chinasi che svolge diverse funzioni essenziali durante la fase M, tra cui la regolazione della maturazione del centrosoma, l'assemblaggio del fuso, la rimozione delle coesine, l'inattivazione degli inibitori dell'APC/C e la regolazione dell'uscita dalla mitosi e della citochinesi. Riferimenti correlati: PMID:11202906, PMID:12207013, PMID:12447691
• Fosforila una vasta gamma di substrati (ad esempio BORA, BUB1B, CCNB1, CDC25C, FOXM1) riconoscendo i motivi pre-fosforilati attraverso i suoi domini POLO box, amplificando così i segnali regolatori mitotici. Riferimenti correlati: PMID:11202906, PMID:12207013, PMID:12447691
• Chiave per le funzioni del centrosoma e l'assemblaggio del fuso bipolare; fosforila KIZ, NEDD1 e NINL per promuovere il reclutamento del complesso ad anello della gamma-tubulina e l'organizzazione del centrosoma. Riferimenti correlati: PMID:16980960, PMID:19509060, PMID:12852856
• Regola l'uscita dalla mitosi e la citochinesi tramite fosforilazione di CEP55, ECT2, KIF20A/MKLP2, PRC1 e RACGAP1, creando siti di docking sul fuso centrale per il fattore di scambio Rho GTP ECT2 e la formazione del solco di scissione. Riferimenti correlati: PMID:12939256, PMID:16247472, PMID:17351640, PMID:19468300, PMID:19468302
• Guida la transizione G2/M fosforilando CDC25C, WEE1, PKMYT1 e CCNB1, portando all'attivazione di CDK1; aumenta anche l'attività trascrizionale di FOXM1. Riferimenti correlati: PMID:11202906, PMID:12447691, PMID:12524548, PMID:19160488
• È coinvolto nelle funzioni del cinetocore e nella coesione delle cromatidi fratelli; fosforila BUB1B, FBXO5 e STAG2 per regolare l'attacco del cinetocore, il punto di controllo dell'assemblaggio del fuso e la dissociazione della coesina. Riferimenti correlati: PMID:15148369, PMID:15469984, PMID:17376779, PMID:17617734, PMID:18331714
• Presenta una localizzazione subcellulare dinamica: nucleo, centrosoma, cinetocore, fuso e corpo mediano. È altamente espresso nella placenta e nel colon.
• Inoltre, contribuisce al recupero dal danno del DNA, alla rottura dell'involucro nucleare, alla risposta allo shock termico e alla biogenesi dei cigli attraverso la fosforilazione di vari bersagli (ad esempio DCTN1, DZIP1, HSF1). Riferimenti correlati: PMID:18615013, PMID:18662541, PMID:20679239, PMID:15661742, PMID:18794143, PMID:27979967, PMID:37440612, PMID:37674080

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 304–603, che coprono i domini POLO box C-terminali; questa regione è altamente conservata, il che supporta la reattività crociata con la PLK1 di topo e ratto.
• Per il Western blotting, aspettatevi una banda a circa 68 kDa; convalidare con controlli positivi e negativi appropriati e considerare l'uso di linee cellulari sincronizzate in mitosi per una rilevazione ottimale.
• In IHC-P e IF/ICC, ottimizzare le condizioni di fissazione/permeabilizzazione; la PLK1 mostra una localizzazione dinamica (centrosomi, cinetocori, corpo mediano) che può richiedere una permeabilizzazione delicata per preservare l'antigenicità.
• Poiché si tratta di un anticorpo policlonale, la titolazione è essenziale per ogni applicazione; iniziare con 1:500–1:2000 per WB e regolare in base all'abbondanza del bersaglio e al metodo di rilevazione.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato sia come reagente di cattura che di rilevazione; l'abbinamento con un anti-PLK1 monoclonale può aumentare la specificità nei saggi sandwich.
• Verificare la reattività crociata nel vostro sistema modello; sebbene sia reattivo con uomo, topo e ratto, i livelli di espressione del bersaglio variano tra tessuti e linee cellulari.

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