Anticorpo Policlonale Anti-PLK3 per WB, ELISA - Q9H4B4

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di PLK3

• Identità proteica e famiglia: La serina/treonina-proteina chinasi PLK3 (nota anche come chinasi serina/treonina indotta da citochine, chinasi indotta da FGF, chinasi correlata alla proliferazione) è un membro della famiglia delle chinasi polo-like. Contiene un dominio catalitico e domini POLO box che mediano il riconoscimento del substrato attraverso il legame dipendente dalla fosforilazione.
• Regolazione del ciclo cellulare: PLK3 è necessaria per l'ingresso nella fase S e per la citochinesi. Regola il checkpoint G2 e la progressione mitotica fosforilando CDC25C e BCL2L1, influenzando le transizioni del ciclo cellulare.
• Risposta allo stress e danno al DNA: PLK3 viene rapidamente attivata in seguito a stimoli di stress come radiazioni ionizzanti, specie reattive dell'ossigeno (ROS), stress iperosmotico, irradiazione UV e ipossia. Fosforila p53/TP53 per promuovere l'apoptosi, CHEK2 per rafforzare il checkpoint G2/M e p73/TP73 per inibirne le funzioni pro-apoptotiche.
• Principali bersagli di fosforilazione: I substrati di PLK3 includono ATF2, BCL2L1, CDC25A, CDC25C, CHEK2, HIF1A, JUN, p53/TP53, p73/TP73, PTEN, TOP2A e VRK1. Queste interazioni mediano i suoi ruoli nel controllo dei checkpoint, nell'apoptosi e nella dinamica del Golgi.
• Smontaggio dell'apparato di Golgi: PLK3 partecipa alla frammentazione del Golgi durante la mitosi attraverso una via dipendente da MEK1/MAP2K1 fosforilando VRK1 a livello dell'apparato di Golgi, garantendo una corretta ripartizione degli organelli.
• Localizzazione subcellulare: PLK3 mostra una localizzazione dinamica nel citoplasma, nucleo, nucleolo, apparato di Golgi e centrosoma, coerente con le sue funzioni multifaccettate nel ciclo cellulare e nella segnalazione dello stress.
• Espressione tissutale e differenziativa: I trascritti sono altamente rilevati in placenta, polmone, muscolo scheletrico, cuore, pancreas, ovaie e rene; debolmente in fegato e cervello. Nelle cellule ematopoietiche, PLK3 è espressa fortemente e specificamente nei macrofagi terminalmente differenziati. L'espressione è regolata negativamente nei tumori polmonari primari.
• Modificazioni post‑traduzionali e parole chiave: PLK3 è classificata come una fosfoproteina (identificazione proteomica) con attività di legame all'ATP e serina/treonina‑proteina chinasi. Le parole chiave UniProt includono apoptosi, ciclo cellulare, danno al DNA, apparato di Golgi e proteoma di riferimento.

Linee Guida Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 487–646 (regione C‑terminale), coprendo parte del secondo dominio POLO box. Questa regione può offrire specificità all'interno della famiglia PLK; la reattività crociata con PLK1 o PLK2 dovrebbe essere confermata sperimentalmente se necessario.
• Per il Western blot (WB), il peso molecolare previsto è ~72 kDa. Convalidare il rilevamento nella specie prevista (umano, topo, ratto) e nel tipo di campione. Utilizzare controlli di caricamento appropriati e considerare lisati con knockdown mediato da siRNA o knockout per verificare l'identità della banda.
• Le applicazioni ELISA possono essere ottimizzate testando le condizioni di rivestimento e le diluizioni dell'anticorpo; l'anticorpo è fornito come policlonale di coniglio, adatto per i protocolli ELISA indiretti standard.
• Per studiare le vie indotte dallo stress, trattare le cellule con agenti dannosi per il DNA (ad es. etoposide, UV), induttori di ROS (ad es. H₂O₂) o mimetici dell'ipossia (ad es. CoCl₂) e confermare l'attivazione o i cambiamenti di espressione di PLK3 mediante WB.
• Per l'immunofluorescenza o l'immunoistochimica, gli utenti dovrebbero stabilire condizioni di fissazione e permeabilizzazione compatibili con i compartimenti subcellulari rilevati (citoplasmatico, nucleare, Golgi). Notare che i livelli endogeni di PLK3 possono essere bassi in alcuni tipi cellulari; potrebbe essere necessario un arricchimento o un'amplificazione del segnale.

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