Anticorpo monoclonale Anti-PMEL (gp100) per WB, IHC-P, ELISA - P40967

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PMEL

• La proteina dei melanociti PMEL (nota anche come gp100, HMB-45 o SILV) è una proteina premelanica che svolge un ruolo centrale nella morfogenesi dei melanosomi e nella pigmentazione.
• Durante la maturazione dei melanosomi, i frammenti amiloidogenici elaborati di PMEL si assemblano in foglietti fibrillari paralleli, guidando l'allungamento dei premelanosomi di stadio I in melanosomi ellissoidi striati di stadio II.
• Nei melanosomi pigmentati di stadio III e IV, la matrice amiloide serve come piattaforma per concentrare i precursori dell'eumelanina, facilitando una sintesi efficiente della melanina mentre potenzialmente sequestra gli intermedi tossici della reazione.
• PMEL è un antigene ben caratterizzato specifico per il melanoma; i peptidi immunodominanti derivati da PMEL, come G9-154 (KTWGQYWQV) e G9-209 (ITDQVPFSV), sono presentati dalle molecole HLA-A e stimolano risposte delle cellule T citotossiche anti-tumorali.
• A livello subcellulare, PMEL si localizza alla membrana del reticolo endoplasmatico, all'apparato di Golgi, alla membrana della rete cis-Golgi, agli endosomi (corpi multivesicolari) e ai melanosomi, ed è presente anche nelle vescicole extracellulari e nelle forme secretate.
• La proteina subisce estese modifiche post-traduzionali, inclusa la clivaggio su coppie di residui di base, la formazione di ponti disolfuro, la glicosilazione e l'aggiunta di acido sialico.
• Normalmente espressa a bassi livelli nei melanociti adulti quiescenti, PMEL è sovraespressa dai melanociti neonatali proliferanti e durante la crescita tumorale, in particolare nei melanomi e in alcune nevi displastiche.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 25-211) di PMEL umano, che è prevista essere extracellulare/luminale; considerare questo durante la progettazione delle strategie di rilevamento o l'abbinamento con altri anticorpi.
• Per il Western blotting, il PMEL non elaborato a lunghezza intera migra a circa 70 kDa, ma si noti che il PMEL endogeno è elaborato proteoliticamente in più frammenti; validare il modello di bande previsto nei vostri lisati.
• Nell'immunoistochimica (paraffina), la colorazione di PMEL dovrebbe essere membranosa/citoplasmatica nei melanociti e nelle cellule di melanoma; includere appropriati controlli positivi (tessuto di melanoma) e negativi.
• Per le applicazioni ELISA, utilizzare la proteina PMEL ricombinante o peptidi sintetici come antigeni di rivestimento e titolare attentamente l'anticorpo per ottenere un rapporto segnale/rumore ottimale.
• Dato che l'espressione di PMEL può variare con lo stato di attivazione dei melanociti, considerare l'utilizzo di linee cellulari di melanoma note (es. SK-MEL-28) o melanociti primari come controlli positivi.

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