Anticorpo Policlonale Anti-PMEL per WB, IF/ICC, ELISA - P40967

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di PMEL

• PMEL (noto anche come gp100, Pmel17, SILV, ME20) è una glicoproteina transmembrana di tipo I specifica dei melanociti che svolge un ruolo centrale nella biogenesi dei melanosomi. È il precursore delle fibrille amiloidi fisiologiche all'interno dei melanosomi.
• La proteina subisce un processamento proteolitico altamente regolato; i suoi frammenti amiloidogenici si assemblano in fogli fibrillari paralleli che guidano l'allungamento dei premelanosomi di stadio I nei melanosomi striati ed ellissoidali di stadio II.
• Nei melanosomi maturi pigmentati di stadio III e IV, la matrice amiloide funge da impalcatura per la polimerizzazione dell'eumelanina, concentrando i precursori e possibilmente sequestrando intermedi tossici.
• La localizzazione subcellulare comprende più compartimenti: si trova nella membrana del reticolo endoplasmatico, nell'apparato di Golgi, nella membrana della rete cis-Golgi, negli endosomi (corpi multivescicolari), nei melanosomi e nelle vescicole extracellulari secrete.
• PMEL è riconosciuto come un antigene tumorale specifico del melanoma. Tra i suoi peptidi self non mutati, epitopi ristretti all'HLA-A2 come G9-154 (KTWGQYWQV), G9-209 (ITDQVPFSV) e G9-280 (YLEPGPVTA) sono immunodominanti e possono stimolare risposte di cellule T citotossiche.
• È normalmente espresso a bassi livelli nei melanociti adulti quiescenti, ma è fortemente sovraespresso nei melanociti neonatali proliferanti e durante la crescita tumorale, in particolare nei melanomi maligni. Si riscontra anche una certa espressione nei nevi displastici.
• Le modifiche post-traduzionali includono una glicosilazione estesa (carboidrati contenenti acido sialico), la formazione di legami disolfuro e il taglio su coppie di residui basici. La proteina matura contiene un peptide segnale, un'elica transmembrana e ripetizioni luminali/extracellulari.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 320–430 all'interno dell'ectodominio del PMEL umano, una regione probabilmente esposta e adatta al riconoscimento sia della forma a lunghezza intera che dei frammenti processati.
• Per il Western blot, confermare la banda prevista a lunghezza intera a circa 70 kDa; potrebbero essere osservate bande aggiuntive più basse che rappresentano frammenti amiloidogenici clivati (es. Mα, Mβ) negli estratti di cellule melanocitiche.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, la localizzazione nei melanosomi può essere convalidata utilizzando linee cellulari di melanoma (es. SK-MEL-28, Mel-624) o melanociti primari; è consigliabile una co-colorazione con marcatori di melanosomi.
• Le applicazioni ELISA dovrebbero essere ottimizzate utilizzando PMEL ricombinante o lisati cellulari; a causa della natura policlonale, questo anticorpo può fornire un'elevata sensibilità ma richiede un'attenta titolazione.
• È dichiarata la reattività crociata con il PMEL di topo e ratto; tuttavia, raccomandiamo di verificare la reattività nella specifica specie e contesto tissutale prima di studi su larga scala.

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