Anticorpo policlonale di coniglio anti-PMS2 per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P54278

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di PMS2

• PMS2 (omologo 2 della proteina PMS1) è un componente centrale del sistema di riparazione post-replicativa dei mismatch del DNA (MMR), dove forma un eterodimero con MLH1 per costituire il complesso MutL alfa. Riferimenti correlati: PMID:30653781 PMID:35189042
• Il reclutamento di MutL alfa sul mismatch è mediato da MutS alfa (MSH2-MSH6) o MutS beta (MSH2-MSH3), e l'assemblaggio del complesso ternario con RFC e PCNA attiva l'attività endonucleasica latente di PMS2, introducendo rotture a singolo filamento in prossimità del mismatch.
• Il meccanismo di discriminazione del filamento si basa sulla metilazione del DNA: il filamento di nuova sintesi, non metilato, viene tagliato preferenzialmente, garantendo la correzione degli errori di replicazione.
• In qualità di endonucleasi, PMS2 genera punti di ingresso per l'esonucleasi EXO1, che escide il filamento contenente l'errore, e interagisce inoltre fisicamente con le subunità del caricatore della pinza della DNA polimerasi III, suggerendo un ruolo nel reclutamento della polimerasi replicativa per la sintesi di riparazione.
• Oltre all'MMR, PMS2 è implicata nella segnalazione del danno al DNA, inducendo l'arresto del ciclo cellulare o l'apoptosi in risposta a lesioni estese del DNA, agendo quindi come soppressore tumorale.
• PMS2 possiede un'attività ATPasica intrinseca; tuttavia, l'idrolisi dell'ATP potrebbe non essere essenziale per una riparazione efficiente dei mismatch in determinate condizioni. Riferimenti correlati: PMID:35189042
• La proteina è localizzata esclusivamente nel nucleo ed è fosforilata in più siti. Le mutazioni in PMS2 sono associate al carcinoma colorettale ereditario non poliposico (sindrome di Lynch) e ad altre neoplasie maligne.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 390–670 della regione C-terminale di PMS2 umano, che contiene il sito attivo dell'endonucleasi; si consiglia di validare la reattività in campioni che esprimono varianti di PMS2 a lunghezza completa o troncate.
• Per il Western blot (WB), si prevede una banda a circa 96 kDa; utilizzare un controllo positivo come i lisati cellulari HeLa o HEK293 e includere estratti nucleari per aumentare il segnale.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), PMS2 mostra un pattern di colorazione nucleare; si raccomanda la co-colorazione con un marcatore nucleare per confermarne la localizzazione.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), l'anticorpo può immunoprecipitare il complesso MutL alfa (MLH1-PMS2); validare la co-precipitazione nelle linee cellulari pertinenti.
• È riportata una reattività crociata con PMS2 murino; per gli studi su topo, verificare le prestazioni nel tessuto o nel tipo cellulare previsto.
• Ottimizzare le diluizioni dell'anticorpo per ciascuna applicazione e sistema di campionamento, poiché la reattività può variare in base ai livelli di espressione e alle modifiche post-traduzionali.

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