Anticorpo monoclonale coniglio anti-POLR2A (N-terminale) per WB, IP, ChIP, ELISA - P24928

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di POLR2A

• POLR2A codifica per la subunità catalitica più grande dell'RNA polimerasi II (Pol II), che sintetizza precursori di mRNA e molti RNA non codificanti funzionali utilizzando nucleosidi trifosfati come substrati. Riferimenti correlati: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• Durante l'inizio della trascrizione, la Pol II viene reclutata sui promotori del DNA, e POLR2A forma il centro attivo con POLR2B, contribuendo con un motivo DxDGD che coordina Mg²⁺, essenziale per l'aggiunta di nucleotidi. Riferimenti correlati: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112

• Il dominio C-terminale unico (CTD) consiste di 52 ripetizioni eptapeptidiche e funge da piattaforma per l'assemblaggio di fattori che regolano l'inizio, l'elongazione, la terminazione della trascrizione e il processamento co-trascrizionale. Riferimenti correlati: PMID:24207025, PMID:26124092

• POLR2A mostra un'attività intrinseca di proofreading esonucleasica 3'→5', che consente la rimozione di nucleotidi incorporati erroneamente attraverso backtracking e scissione del legame fosfodiesterico. Riferimenti correlati: PMID:8381534

• La fosforilazione del CTD su Ser-5 media la fuoriuscita dal promotore, mentre la fosforilazione di Ser-2 è necessaria per il rilascio dalla pausa durante l'elongazione; la metilazione e l'acetilazione delle lisine del CTD modulano finemente i livelli di espressione genica. Riferimenti correlati: PMID:24207025, PMID:26124092

• Oltre alla trascrizione DNA-dipendente, POLR2A può funzionare come una RNA polimerasi RNA-dipendente, allungando RNA non codificanti e replicando il genoma del virus dell'epatite delta durante l'infezione. Riferimenti correlati: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• La proteina si localizza nel nucleo, nel citoplasma e sui cromosomi, riflettendo i suoi ruoli dinamici nella trascrizione e nel processamento dell'RNA.

• Lo splicing alternativo genera multiple isoforme, e varianti di POLR2A associate a malattie sono state collegate a disturbi del neurosviluppo (es. NEDHIB).

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Il bersaglio dell'immunogeno (aa550-650) si trova nella regione N-terminale ed è conservato tra umano, topo e ratto, supportando la reattività incrociata osservata; considerare l'allineamento delle sequenze per altre specie.
• Per il Western blot, aspettarsi una banda vicina a 217 kDa; utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6%) e ottimizzare le condizioni di trasferimento per proteine ad alto peso molecolare.
• Nell'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), validare la specificità dell'anticorpo con loci genomici positivi e negativi, e ottimizzare i protocolli di crosslinking e frammentazione a causa delle grandi dimensioni del complesso Pol II.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), condizioni di lisi blande e l'inclusione di un trattamento nucleasico possono migliorare la solubilità di POLR2A legata alla cromatina.
• L'anticorpo è anche adatto per ELISA; considerare l'abbinamento con un anticorpo di cattura per il rilevamento sandwich di complessi Pol II nativi.

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