Anticorpo policlonale di coniglio Anti-POLR2A per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P24928

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di POLR2A

• POLR2A codifica la subunità più grande (RPB1) della RNA polimerasi II diretta dal DNA, l'enzima responsabile della sintesi dei precursori dell'mRNA e di molti RNA non codificanti nelle cellule eucariotiche.
• RPB1 forma il nucleo catalitico della Pol II insieme alla seconda subunità più grande RPB2. Contiene un motivo conservato DxDGD che coordina uno ione Mg²⁺ essenziale per l'aggiunta di nucleotidi durante la polimerizzazione dell'RNA. Riferimenti correlati: PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• L'enzima attraversa i cicli di inizio, allungamento e terminazione della trascrizione. Durante l'iniziazione, la Pol II viene reclutata sui promotori che contengono elementi come la scatola TATA o le isole CpG. Riferimenti correlati: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• RPB1 possiede un dominio C-terminale (CTD) unico composto da 52 ripetizioni di eptapeptidi. Il CTD subisce una fosforilazione dinamica (specialmente su Ser-2 e Ser-5) per coordinare le fasi della trascrizione e reclutare i fattori di processamento. Riferimenti correlati: PMID:24207025, PMID:26124092
• Oltre alla sua attività di RNA polimerasi dipendente dal DNA, POLR2A può agire come RNA polimerasi dipendente dall'RNA, estendendo gli RNA non codificanti e mediando la replicazione del virus dell'epatite delta.
• La proteina si localizza prevalentemente nel nucleo, ma si trova anche nel citoplasma e è associata ai cromosomi durante la mitosi.
• Le mutazioni in POLR2A sono associate a disturbi del neurosviluppo, inclusa la disabilità intellettiva (NEDHIB), che evidenziano il suo ruolo essenziale nell'espressione genica.
• Lo splicing alternativo e le modifiche post-traduzionali (acetilazione, metilazione, ubiquitinazione, fosforilazione) diversificano ulteriormente la funzione e la regolazione di POLR2A.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1-260) di POLR2A umano, che si trova al di fuori del CTD ripetitivo. Questo progetto può conferire specificità per il core di RPB1 rispetto al CTD altamente omologo presente in alcune altre proteine.
• L'anticorpo ha dimostrato di funzionare in WB, IF/ICC, IP e ELISA. Quando si esegue la WB, annotare il peso molecolare previsto di ~217 kDa; considerare l'uso di un gel SDS-PAGE a bassa percentuale e un'ottimizzazione accurata del trasferimento per una proteina così grande.
• È riportata la reattività crociata con topo e ratto, il che suggerisce che l'epitopo è conservato in queste specie. Convalidare nel vostro sistema modello specifico per confermare.
• Per IF/ICC, ci si aspetta una colorazione nucleare e perinucleare in base alla localizzazione di POLR2A; tuttavia, lo sfondo può variare a seconda delle condizioni di fissazione e permeabilizzazione.
• Negli esperimenti di IP, assicurarsi che il tampone di lisi sia compatibile con l'estrazione di proteine nucleari per solubilizzare efficacemente i complessi della Pol II.

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