Anticorpo monoclonale di coniglio anti-POLR2D per WB, IHC-P, ELISA - O15514

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di POLR2D

• POLR2D (subunità RPB4 della RNA polimerasi II DNA-dipendente, nota anche come RBP4, RPB16) è una subunità fondamentale della RNA polimerasi II (Pol II) umana, l'enzima centrale responsabile della sintesi dei precursori dell'mRNA e di molti RNA non codificanti.
• In quanto parte di un sottocomplesso conservato con POLR2G/RPB7, POLR2D si lega a una tasca formata dalle subunità RPB1, RPB2 e RPABC2 vicino alla base dell'elemento a pinza della Pol II, contribuendo a bloccare la pinza in una conformazione chiusa e impedendo al DNA a doppio filamento di entrare prematuramente nella fessura del sito attivo.
• Il sottocomplesso POLR2D/POLR2G interagisce inoltre con il DNA e l'RNA a singolo filamento, suggerendo un ruolo nella gestione degli acidi nucleici durante l'inizio o l'allungamento della trascrizione.
• POLR2D è localizzata esclusivamente nel nucleo, in accordo con il suo ruolo nel meccanismo di trascrizione.
• La proteina è stata oggetto di studi strutturali (parola chiave: 3D-structure) ed è stata identificata mediante studi di proteomica basati sulla spettrometria di massa, a sostegno della sua stabile incorporazione nella Pol II.
• Per POLR2D non sono state segnalate isoforme specifiche dei tessuti né modificazioni post-traduzionali, il che implica un ruolo relativamente uniforme nei diversi tipi cellulari.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è costituito da una proteina ricombinante comprendente gli amminoacidi 1–142 della POLR2D umana. Questa regione N-terminale è altamente conservata, il che può spiegare la reattività crociata dell'anticorpo con topo e ratto.
• Per il Western blot (WB), il peso molecolare previsto di POLR2D è di circa 16 kDa; utilizzare un gel ad alta percentuale o un gel a gradiente per garantire una separazione chiara delle bande a basso peso molecolare e includere appropriati controlli di caricamento.
• Nell'IHC-P è prevista una forte colorazione nucleare; considerare protocolli di recupero antigenico e validare la specificità utilizzando peptidi bloccanti o tessuti di controllo sottoposti a knockdown/knockout, ove possibile.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato in saggi diretti o sandwich; tuttavia, gli utenti finali dovrebbero ottimizzare le condizioni di rivestimento e le concentrazioni dell'anticorpo in base alla propria configurazione sperimentale specifica.

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