Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Proteinasi K - P06873

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Proteinasi K

• La Proteinasi K è una serina proteasi ad ampio spettro originariamente isolata dal fungo Parengyodontium album (precedentemente Tritirachium album), codificata dal gene PROK.
• Appartiene alla famiglia delle serina proteasi simili alla subtilisina ed è caratterizzata dalla classica triade catalitica (Asp-His-Ser) responsabile dell'idrolisi del legame peptidico.
• L'enzima scinde preferenzialmente i legami peptidici adiacenti a residui amminoacidici aromatici e idrofobici, consentendo una degradazione efficace della cheratina e di altre proteine recalcitranti.
• La Proteinasi K è sintetizzata come una preproproteina con un peptide segnale e un propeptide, che vengono rimossi proteoliticamente per produrre l'enzima maturo attivo di circa 28,9 kDa (forma matura) con un peso molecolare totale della preproteina di circa 40,3 kDa.
• La sua stabilità e attività sono potenziate dal legame con il calcio, che protegge dall'autolisi e dalla denaturazione termica; due ponti disolfuro stabilizzano ulteriormente la struttura terziaria.
• Sono state risolte strutture tridimensionali (ad es. voci PDB), che rivelano un tipico ripiegamento della subtilisina con una profonda fessura di legame per il substrato.
• Grazie alla sua robusta attività proteolitica ad ampio spettro, la Proteinasi K è ampiamente utilizzata in biologia molecolare per la rimozione delle proteine durante la purificazione degli acidi nucleici e in varie applicazioni industriali.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è una proteina ricombinante di Proteinasi K, che può presentare epitopi sia nativi che denaturati; considerare questo aspetto quando si sceglie tra condizioni native o denaturanti per il proprio saggio.
• Per il WB, assicurarsi una corretta preparazione del campione, inclusi tamponi di lisi appropriati e inibitori delle proteasi per evitare la degradazione del bersaglio. Utilizzare un anticorpo secondario anti-coniglio adatto e ottimizzare il bloccaggio per ridurre il fondo.
• Per l'ELISA, convalidare il saggio con controlli positivi e negativi noti; la reattività dell'anticorpo con l'antigene nativo rispetto a quello immobilizzato può differire, quindi considerare le strategie di immobilizzazione dell'antigene.

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