Anticorpo policlonale di coniglio Anti-PSAP (Prosaposina) per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P07602

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della PSAP (Prosaposina)

• La prosaposina (PSAP) è una glicoproteina precursore di 524 aminoacidi che viene elaborata proteoliticamente nei lisosomi per generare quattro peptidi saposina omologhi (saposina A, B, C e D), i quali fungono da proteine attivatrici non enzimatiche essenziali per le idrolasi degli sfingolipidi.
• Le saposine facilitano la degradazione dei glicosfingolipidi estraendo i substrati lipidici dai doppi strati di membrana e presentandoli ai loro enzimi cognati; la saposina B attiva l'arilsolfatasi A, la beta-galattosidasi e l'alfa-galattosidasi A, mentre la saposina C attiva la glucocerebrosidasi e la saposina D attiva la ceramidasi acida.
• Oltre al suo ruolo di cofattore lisosomiale, la prosaposina a lunghezza intera esplica funzioni neurotrofiche e mielino-trofiche segnalando attraverso i recettori accoppiati a proteine G GPR37 e GPR37L1, promuovendo la sopravvivenza neuronale e la mielinizzazione.
• La PSAP è ampiamente espressa, con livelli elevati nel cervello, nei reni e nel fegato, e si localizza principalmente nel lume lisosomiale; viene anche secreta e rilevata nei fluidi extracellulari, incluso il liquido cerebrospinale e il latte.
• Le mutazioni nella PSAP sono associate a varie malattie da accumulo lisosomiale, inclusa la malattia di Gaucher, la leucodistrofia metacromatica e la malattia di Krabbe, nonché a forme complesse con carenze combinate di saposine; i polimorfismi sono stati anche collegati al rischio di malattia di Parkinson.
• La proteina contiene molteplici legami disolfuro intracatena e siti di glicosilazione N-legata che sono critici per la sua stabilità, elaborazione e attivazione funzionale. Il precursore canonico della prosaposina ha una massa molecolare calcolata di 58,1 kDa; l'estesa glicosilazione spesso risulta in bande a 65–70 kDa su SDS-PAGE.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde ai residui 275–524 della PSAP umana, coprendo i domini saposina C e D e il linker C-terminale; l'anticorpo policlonale risultante è previsto per rilevare sia il precursore a lunghezza intera che possibilmente i frammenti elaborati saposina C/D.
• Per il Western blot, si consiglia la standard SDS-PAGE in condizioni riducenti; una banda predominante a ~58 kDa è comunemente osservata nei lisati di tessuti umani, di topo e di ratto, rappresentando il precursore della prosaposina. Ulteriori bande inferiori possono derivare dall'elaborazione proteolitica.
• Quando si esegue l'immunofluorescenza, è richiesta la permeabilizzazione per accedere alla localizzazione lisosomiale; si consiglia la colorazione simultanea con un marcatore lisosomiale (es. LAMP1) per studi di colocalizzazione.
• Per l'immunoistochimica su sezioni incluse in paraffina, il recupero dell'antigene con tampone citrato (pH 6,0) migliora spesso il segnale; i tessuti di controllo positivi includono il cervello (cervelletto, ippocampo) e il rene.
• Questo anticorpo può essere utilizzato in ELISA come reagente di cattura o di rilevamento quando abbinato a un adatto anticorpo monoclonale anti-PSAP; le diluizioni ottimali e le condizioni del saggio devono essere determinate empiricamente.

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