Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-PSMB10 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P40306

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di PSMB10

• PSMB10 codifica per la subunità beta tipo-10 del proteasoma, nota anche come LMP10, MECL1 o beta2i, un componente catalitico dell'immunoproteasoma che sostituisce le subunità del proteasoma costitutivo in seguito a stimolazione immunitaria.
• Presenta attività chimotripsino-simile e tripsino-simile, scindendo i legami peptidici dopo residui idrofobici e basici, ed è essenziale per generare peptidi antigenici presentati dalle molecole MHC di classe I.
• PSMB10 è indotta dall'interferone-gamma e si incorpora nell'immunoproteasoma, alterando la specificità di scissione per favorire la produzione di peptidi con maggiore affinità per il legame con MHC di classe I, potenziando così le risposte immunitarie adattative.
• La proteina è localizzata sia nel citoplasma che nel nucleo, dove partecipa alla proteolisi dipendente e indipendente dall'ubiquitina, contribuendo al controllo di qualità delle proteine e alla regolazione del ciclo cellulare.
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione e fosforilazione, e la proteina è sintetizzata come zimogeno inattivo che viene attivato dalla rimozione autocatalitica del suo propeptide.
• Mutazioni in PSMB10 sono state collegate a sindromi autoinfiammatorie associate al proteasoma (es. PRAAS5), sottolineando l'importanza clinica di una corretta funzione dell'immunoproteasoma.
• PSMB10 interagisce con proteine virali e la sua attività proteasica può essere modulata durante le interazioni ospite-virus, influenzando potenzialmente l'elaborazione degli antigeni virali e l'evasione immunitaria.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno utilizzato corrisponde alla proteina PSMB10 umana a lunghezza intera (amminoacidi 1-273), garantendo che l'anticorpo policlonale riconosca multipli epitopi nativi; per il WB, ci si aspetta una banda vicina a 29 kDa, sebbene possano essere visibili forme precursori.
• Nell'IHC-P e nell'IF/ICC, prevedere pattern di colorazione sia citoplasmatici che nucleari; la co-colorazione con marcatori del proteasoma o dell'immunoproteasoma (es. PSMB8, PSMB9) può aiutare a confermare la specificità.
• Per applicazioni ELISA, considerare l'uso di complessi immunoproteasoma ricombinanti o PSMB10 purificata come antigeni di rivestimento per stabilire la sensibilità e l'intervallo dinamico del saggio.
• A causa dell'elevata omologia di sequenza, si prevede che l'anticorpo reagisca in modo incrociato con PSMB10 di topo e ratto; tuttavia, verificare sempre la reattività nella specie e nel tessuto di interesse utilizzando controlli appropriati (es. lisati tissutali da modelli wild-type e knockout).
• Quando si studiano le dinamiche dell'immunoproteasoma, il trattamento con interferone-gamma o altri stimoli immunitari può essere utilizzato per aumentare l'espressione di PSMB10 nelle cellule coltivate; includere controlli non trattati per differenziare l'espressione costitutiva da quella indotta.
• Per studi funzionali, possono essere impiegati inibitori del proteasoma (es. epoxomicina, bortezomib) per validare la specificità dell'anticorpo bloccando l'attività catalitica, ma notare che il trattamento con inibitori può influenzare la composizione delle subunità.

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