Anticorpo policlonale coniglio anti-PSMD14 per WB, IF/ICC, ELISA - O00487

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PSMD14

• PSMD14, noto anche come POH1 o RPN11, è un componente della subunità regolatrice del proteasoma 26S, un grande complesso multiproteico responsabile della degradazione dipendente da ATP delle proteine ubiquitinate, cruciale per l'omeostasi proteica, la progressione del ciclo cellulare, l'apoptosi e la riparazione del DNA. Riferimenti correlati: PMID:9374539 PMID:1317798

• Funziona come metalloproteasi che cliva specificamente le catene poliubiquitinate legate a 'Lys-63' all'interno del proteasoma 26S, un'attività di deubiquitinazione critica richiesta per il processamento del substrato e il riciclo dell'ubiquitina. Riferimenti correlati: PMID:22909820

• Nella riparazione dei danni al DNA, PSMD14 promuove il giunzione di estremità non omologhe (NHEJ) rimuovendo il poliubiquitina legata a Lys-63, facilitando la ritenzione cromatinica di JMJD2A/KDM4A e limitando l'accumulo di TP53BP1; migliora anche la ricombinazione omologa supportando il caricamento di RAD51. Riferimenti correlati: PMID:22909820

• Inoltre, PSMD14 regola la macroautofagia assicurando il trasporto retrogrado dal Golgi al RE tramite la sua attività di deubiquitinazione, prevenendo la localizzazione errata delle proteine essenziali per l'autofagia e consentendo la corretta formazione degli autofagosomi. Riferimenti correlati: PMID:32210007

• La proteina è ampiamente espressa, con i livelli più alti nel cuore e nel muscolo scheletrico, riflettendo il suo ruolo essenziale di manutenzione.

• Le caratteristiche strutturali e funzionali chiave includono il suo dominio metalloproteasico con legame allo zinco e la sua classificazione come proteasi tiolica; è anche una fosfoproteina e parte della via di coniugazione dell'ubiquitina.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato corrisponde agli amminoacidi 160-300 di PSMD14 umano, una regione prevista essere esposta e conservata tra le specie, il che può contribuire alla reattività crociata dell'anticorpo con topo e ratto.
• Per il Western blot (WB), la banda prevista è a ~35kDa; considerare l'uso di controlli di carico appropriati e validare il segnale con lisati siRNA o knockout per confermare la specificità.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), includere controlli negativi (es. solo anticorpo secondario) e verificare la localizzazione con marcatori di organelli, poiché PSMD14 si associa al proteasoma sia nei compartimenti citoplasmatici che nucleari.
• Per l'ELISA, eseguire esperimenti di titolazione per determinare la concentrazione ottimale dell'antigene di rivestimento e dell'anticorpo; le prestazioni dell'anticorpo devono essere validate nella matrice del campione pertinente.

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