Anticorpo policlonale di coniglio anti-PTPN2 per WB, IF/ICC, ELISA - P17706

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di PTPN2

• La tirosina-proteina fosfatasi non recettoriale di tipo 2 (PTPN2), nota anche come tirosina fosfatasi della proteina delle cellule T (TCPTP), è una fosfatasi tirosina-specifica non recettoriale che defosforila le tirosin-chinasi proteiche recettoriali e non recettoriali, tra cui INSR, EGFR, JAK1, JAK2, JAK3 e i membri della famiglia STAT, regolando negativamente molteplici vie di segnalazione.
• Svolge un ruolo critico nello sviluppo e nella funzione del sistema immunitario, modulando il recettore delle cellule T, l'interleuchina-2, l'interferone e altre cascate di segnalazione delle citochine; le varianti genetiche e la disregolazione sono implicate nelle malattie autoimmuni e nell'infiammazione.
• È espressa ubiquamente, con l'isoforma 1 localizzata principalmente nelle cellule T e nella placenta, mentre l'isoforma 2 è l'isoforma predominante presente in molti tessuti, evidenziando meccanismi di regolazione tessuto-specifici.
• È localizzata nel reticolo endoplasmatico, nel compartimento intermedio reticolo endoplasmatico-Golgi, nel nucleo, nel citoplasma e nella membrana cellulare, consentendo l'accesso dipendente dal contesto a diversi substrati e nodi di segnalazione.
• Funziona come regolatore metabolico chiave defosforilando il recettore dell'insulina (INSR) e controllando la produzione epatica di glucosio attraverso la via IL-6/STAT3, collegandosi all'omeostasi del glucosio e al diabete di tipo 2.
• Il dominio fosfatasico catalitico è essenziale per la sua attività idrolasica; modifiche post-traduzionali come la fosforilazione e la S-nitrosilazione ne modulano la funzione enzimatica e la distribuzione subcellulare.
• Possiede un segmento C-terminale non catalitico che può mediare le interazioni proteina-proteina e il targeting subcellulare; è stato inoltre riportato che si lega al DNA, suggerendo ulteriori ruoli nucleari oltre alla classica attività fosfatasica.
• In quanto membro della famiglia delle protein-tirosina fosfatasi, contrasta la segnalazione delle tirosin-chinasi e partecipa alla defosforilazione di bersagli oncogenici come EGFR e Src, rendendola di interesse nella ricerca oncologica.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 1-353 della PTPN2 umana (isoforma 1), incluso il dominio catalitico; confermare l'identità della sequenza tra l'immunogeno e la proteina bersaglio nella specie di interesse (uomo, topo, ratto) allineando l'accession NP_536348.1 o UniProt P17706 con i corrispondenti ortologhi.
• Per il Western blot, utilizzare lisati di controllo positivo ottenuti da cellule T Jurkat umane, milza murina o timo di ratto, che esprimono PTPN2; attendersi una banda intorno a 48 kDa (il peso molecolare previsto dell'isoforma 2 è di 48,5 kDa), con possibili segnali aggiuntivi dovuti alle isoforme o a modifiche post-traduzionali.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica, permeabilizzare le cellule in modo appropriato per rilevare le frazioni nucleari e citoplasmatiche; eseguire una co-colorazione con marcatori degli organelli (ad es. ER-Tracker e marcatori del Golgi) se si studiano le dinamiche di trasporto intracellulare.
• In quanto anticorpo policlonale, può riconoscere più epitopi; validare la specificità utilizzando il knockdown mediante siRNA o linee cellulari knockout per PTPN2 e confrontare i profili di espressione con quelli riportati da database pubblici come Human Protein Atlas.
• Per l'ELISA, ottimizzare le condizioni di rivestimento e la concentrazione dell'anticorpo; utilizzare la proteina PTPN2 ricombinante come standard per garantire un intervallo di rilevazione lineare.

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