Anticorpo policlonale coniglio Anti-PUF60 per WB, IP, ELISA - Q9UHX1

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PUF60

• PUF60 (fattore di splicing legante il poli(U) da 60 kDa), noto anche come FIR, RoBPI o Siah-BP1, è una proteina legante il DNA e l'RNA coinvolta nello splicing del pre-mRNA, nell'apoptosi e nella regolazione trascrizionale.
• Agisce come reprimo trascrizionale attraverso il complesso core-TFIIH, riducendo l'attività elicasi di ERCC3 e reprime la trascrizione di MYC indotta da FUBP1 presso il promotore P2.
• Nello splicing del pre-mRNA, PUF60 promuove lo splicing di introni con siti di splicing deboli alla posizione 3' e si lega al tratto di pirimidine e alle regioni del sito di splicing 3' in modo cooperativo con U2AF2.
• L'isoforma 6, espressa nel cancro del colon-retto ma non nell'epitelio normale, non è in grado di reprimere la trascrizione di MYC e inibisce l'apoptosi indotta da FIR, contribuendo potenzialmente alla progressione tumorale.
• PUF60 si localizza nel nucleo ed è ampiamente espresso in tutti i tessuti, inclusi cuore, cervello, polmone, fegato, rene e colon.
• La proteina è soggetta a modifiche post-traduzionali come acetilazione e fosforilazione, ed è un bersaglio noto dell'ubiquitinazione (coniugazione Ubl).

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un frammento ricombinante che copre gli amminoacidi 243–542 di PUF60 umano (NP_055096.2), situato nella regione C-terminale contenente i motivi di riconoscimento dell'RNA; questo progetto può migliorare la specificità.
• Per il Western blot, si consiglia di utilizzare un tampone di trasferimento standard e ottimizzare la diluizione dell'anticorpo primario su un intervallo (ad es. 1:500–1:2000) in base al livello di espressione endogena nel proprio campione.
• Nell'immunoprecipitazione, l'anticorpo è in grado di catturare PUF60 endogeno da lisati cellulari di uomo, topo o ratto; validare mediante co-immunoblotting con un anticorpo anti-PUF60 proveniente da un host diverso.
• Per l'ELISA, la natura policlonale può fornire una robusta amplificazione del segnale; abbinarlo a un anticorpo di rilevamento monoclonale corrispondente per applicazioni sandwich.
• Includere sempre controlli positivi e negativi appropriati (ad es. lisato totale di cellule HeLa per WB) per confermare le prestazioni dell'anticorpo.

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