Anticorpo policlonale anti-PYCRL per WB ed ELISA - Q53H96

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di PYCRL

• PYCRL (3-pirrolina-5-carbossilato reduttasi), nota anche come PYCR3, è un enzima che catalizza la fase finale della biosintesi della prolina, responsabile della conversione del pirrolina-5-carbossilato (P5C) in L-prolina utilizzando NAD(P)H come cofattore. Questa reazione è specificamente associata alla via della prolina derivata dall'ornitina. Riferimenti correlati: PMID:23024808 PMID:36414121
• La proteina è localizzata prevalentemente nel citoplasma, dove agisce sul P5C citoplasmatico generato dal catabolismo dell'ornitina.
• PYCRL è un membro della famiglia delle pirrolina-5-carbossilato reduttasi, insieme a PYCR1 e PYCR2; tuttavia, PYCRL è specificamente dedicata alla via dall'ornitina alla prolina, mentre le altre isoforme svolgono principalmente un ruolo nella sintesi della prolina derivata dal glutammato.
• Lo splicing alternativo del gene PYCR3 produce molteplici varianti trascrizionali, che possono dare origine a isoforme proteiche con funzioni o proprietà regolatorie modificate.
• Sono state riportate modifiche post-traduzionali, come l'acetilazione, che possono modulare l'attività enzimatica o la stabilità.
• Il peso molecolare calcolato della proteina PYCRL è di circa 28,7 kDa, in accordo con la banda osservata a 29 kDa negli esperimenti di western blot.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per i test di western blot (WB), preparare lisati cellulari totali da linee cellulari umane o murine note per esprimere PYCRL; è prevista una singola banda intorno a 29 kDa. A causa della natura policlonale, possono comparire più bande se sono presenti epitopi a reattività crociata; valutare l'utilizzo del blocco con peptide per confermare la specificità.
• Nelle applicazioni ELISA, questo anticorpo può essere utilizzato per ELISA diretto o sandwich per quantificare PYCRL in campioni biologici; titolare l'anticorpo per ottenere un rapporto segnale/rumore ottimale.
• È stata dimostrata la reattività crociata con la PYCRL murina; per altre specie, l'analisi dell'omologia di sequenza può fornire indicazioni sulla potenziale reattività, ma la validazione sperimentale è essenziale.
• Poiché l'immunogeno comprende i residui 13–286, è probabile che l'anticorpo riconosca molteplici epitopi lineari e conformazionali; le condizioni denaturanti e riducenti nel WB sono generalmente compatibili.
• Nello studio del metabolismo della prolina, combinare questo anticorpo con inibitori dell'aminotransferasi dell'ornitina per modulare i livelli di substrato di PYCRL e valutare il flusso della via metabolica.
• Includere sempre controlli appropriati, come linee cellulari knockout per PYCRL o campioni trattati con siRNA, per confermare l'identità della banda.

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