Anticorpo policlonale di coniglio anti-RAB8A per WB, IF/ICC, ELISA - P61006

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di RAB8A

• RAB8A è una piccola GTPasi che alterna conformazioni inattive legate al GDP e attive legate al GTP, agendo come regolatore principale del traffico di membrana intracellulare, del trasporto vescicolare polarizzato e del rilascio dei neurotrasmettitori.
• Promuove la transcitosi di PODXL verso i siti di inizio della membrana apicale (AMIS), guidando la formazione della superficie apicale e la luminalizzazione in collaborazione con RAB11A, il complesso dell'esocisti e le proteine della polarità. Riferimenti correlati: PMID:20890297
• Controlla la morfologia compatta dell'apparato di Golgi, influenzando così l'organizzazione del Golgi e l'elaborazione del carico.
• Collabora con MYO5B e RAB11A per stabilire la polarizzazione delle cellule epiteliali, essenziale per l'architettura e la funzione dei tessuti. Riferimenti correlati: PMID:21282656
• Partecipa al traffico di membrana verso il ciglio primario ed è necessaria per la ciliogenesi, con implicazioni per la segnalazione e lo sviluppo. Riferimenti correlati: PMID:21844891 PMID:30398148 PMID:20631154
• Svolge un ruolo nell'autofagia, contribuendo al sequestro e alla degradazione dei componenti citoplasmatici. Riferimenti correlati: PMID:27103069
• In seguito a stress lisosomiale, RAB8A viene reclutata e stabilizzata mediante la fosforilazione mediata da LRRK2, sopprimendo l'ingrossamento lisosomiale indotto dallo stress attraverso gli effettori EHBP1/EHNP1L1. Riferimenti correlati: PMID:30209220
• Presenta un'ampia localizzazione subcellulare, inclusi la membrana plasmatica, il Golgi, gli endosomi, gli endosomi di riciclo, il ciglio, i fagosomi, il centrosoma, il corpo intermedio e i lisosomi, riflettendo le sue versatili funzioni nel traffico intracellulare.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 140–207 di RAB8A umano (NP_005361.2), una regione probabilmente in grado di generare anticorpi che riconoscono sia la proteina a lunghezza completa sia, potenzialmente, le varianti di splicing; verificare la specificità utilizzando controlli appropriati, come lisati sottoposti a knockdown con siRNA o a knockout.
• Per il Western blot (WB), si prevede una banda di circa 24 kDa sulla base del peso molecolare calcolato; utilizzare un gel SDS-PAGE con una percentuale adeguata per le proteine a basso peso molecolare e considerare la sovraespressione o l'arricchimento in caso di segnali endogeni deboli.
• Per l'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), attendersi pattern di colorazione coerenti con la localizzazione multifattoriale di RAB8A, incluse vescicole citoplasmatiche, Golgi, membrana plasmatica e ciglia; validare la colocalizzazione con marcatori degli organelli.
• Per l'ELISA, assicurare un rivestimento adeguato con l'immunogeno ricombinante o con la proteina nativa ottenuta da lisati cellulari o tissutali ed eseguire una titolazione per ottimizzare il rapporto segnale/rumore.
• È specificata la reattività crociata con RAB8A di topo e ratto; tuttavia, la conservazione dell'epitopo deve essere confermata se si lavora con altre specie o con membri strettamente correlati della famiglia RAB, come RAB10 e RAB13.

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