Anticorpo policlonale anti-Rad50 per WB, IHC-P, ELISA - Q92878

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di Rad50

• RAD50 è un componente del complesso MRN (insieme a MRE11 e NBN), che svolge un ruolo centrale nella riparazione delle rotture a doppio filamento (DSB), nella ricombinazione del DNA e nel mantenimento dell'integrità dei telomeri (PubMed:15064416, PubMed:21757780, PubMed:27889449). Riferimenti correlati: PMID:15064416 PMID:21757780 PMID:27889449
• Il complesso MRN è essenziale per la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA mediante ricombinazione omologa (HR), un meccanismo privo di errori che si verifica principalmente durante le fasi S e G2 (PubMed:15064416, PubMed:21757780). Riferimenti correlati: PMID:15064416 PMID:21757780
• RAD50 contribuisce alla resezione delle estremità del DNA legandosi alle estremità del DNA e regolando le attività esonucleasica/endonucleasica di MRE11; il legame all'ATP induce un cambiamento conformazionale che controlla l'accessibilità della nucleasi MRE11 (PubMed:11741547, PubMed:12805565, PubMed:28134932). Riferimenti correlati: PMID:11741547 PMID:12805565 PMID:28134932
• Il complesso MRN media anche la segnalazione del danno al DNA attivando le chinasi ATM e ATR, una funzione indipendente dall'attività nucleasica di MRE11 (PubMed:15064416, PubMed:15790808, PubMed:16622404). Riferimenti correlati: PMID:15064416 PMID:15790808 PMID:16622404
• RAD50 si localizza nel nucleo ed è presente nei telomeri cromosomici, dove può modulare la formazione dei t-loop (PubMed:10888888). Riferimenti correlati: PMID:10888888
• L'espressione di RAD50 è molto bassa nella maggior parte dei tessuti, mentre livelli più elevati sono stati osservati nei testicoli e nei fibroblasti.
• RAD50 è soggetta a modificazioni post-traduzionali, tra cui acetilazione e fosforilazione, e presenta domini di legame all'ATP, domini coiled-coil e domini di legame allo zinco (parole chiave UniProt).
• Il complesso MRN processa anche gli R-loop, contribuendo alla stabilità genomica (PubMed:31537797). Riferimenti correlati: PMID:31537797

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1-270) della RAD50 umana; pertanto, si prevede che l'anticorpo riconosca l'estremità N-terminale della proteina.
• Per il western blot (WB), RAD50 migra a circa 154 kDa; assicurarsi di utilizzare condizioni appropriate di separazione e trasferimento SDS-PAGE (ad esempio, tempi di trasferimento prolungati) per le proteine ad alto peso molecolare.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), convalidare la colorazione in campioni di testicolo umano o di fibroblasti, che presentano una maggiore espressione di RAD50; prendere in considerazione l'ottimizzazione del recupero antigenico.
• Per l'ELISA, l'immunogeno peptidico sintetico può fungere da controllo positivo per confermare la reattività dell'anticorpo; le prestazioni sulla proteina endogena a lunghezza intera devono essere convalidate indipendentemente.
• Considerato il ruolo centrale di RAD50 nella riparazione del DNA e nella biologia dei telomeri, questo anticorpo può essere utile per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) o per i saggi dei foci di danno al DNA, sebbene tali applicazioni non siano state convalidate con questo prodotto e richiedano un'ottimizzazione da parte dell'utente.

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