Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-RAD50 per WB, ELISA - Q92878

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RAD50

• RAD50 (proteina di riparazione del DNA RAD50), noto anche come NBSLD o hRad50, è un componente centrale del complesso MRN (MRE11-RAD50-NBN) che orchestra le risposte cellulari alle rotture doppio filamento del DNA.
• Il complesso MRN è essenziale per la riparazione delle rotture doppio filamento tramite ricombinazione omologa, dove media la resezione delle estremità del DNA per generare il DNA a singolo filamento necessario per l'invasione del filamento.
  Riferimenti correlati:
  PMID:15064416
  PMID:21757780
  PMID:27889449
• RAD50 lega e collega le estremità del DNA e il suo cambio strutturale dipendente da ATP controlla l'attività nucleasica di MRE11, posizionando i substrati di DNA per la scissione.
  Riferimenti correlati:
  PMID:11741547
  PMID:12805565
  PMID:28134932
• Oltre alla resezione delle estremità, il complesso MRN attiva le chinasi ATM e ATR per trasdurre i segnali di danno al DNA, una funzione indipendente dall'attività nucleasica di MRE11.
  Riferimenti correlati:
  PMID:15064416
  PMID:15790808
  PMID:16622404
• Nei telomeri, il complesso MRN modula la formazione del circuito T, contribuendo all'integrità dei telomeri e alla regolazione della loro lunghezza.
  Riferimenti correlati:
  PMID:10888888
• RAD50 è anche implicato nel processing degli R-loop, risolvendo i conflitti tra trascrizione e replicazione per mantenere la stabilità genomica.
  Riferimenti correlati:
  PMID:31537797
• Subcellolarmente, RAD50 si localizza principalmente nel nucleo, associandosi alla cromatina e ai telomeri.
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione e fosforilazione, che possono regolare la sua attività e le sue interazioni in risposta al danno del DNA.
• L'espressione tissutale è generalmente bassa, con un arricchimento notevole nel testicolo e livelli rilevabili nei fibroblasti.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde a un peptide C-terminale (aa 1200-1300) esterno ai domini conservati di ATPasi e a spirale-avvolto; si consiglia di verificare la specificità tramite controlli di knockdown o knockout nei tipi di campione rilevanti.
• Per Western blot, RAD50 migra a circa 154 kDa; utilizzare una percentuale di gel adatta (ad esempio, gel di separazione al 6%) e assicurare un trasferimento efficiente di questa proteina di grandi dimensioni (ad esempio, tempi di trasferimento umido prolungati).
• L'anticorpo è riportato come reattivo con RAD50 umano, di topo e ratto; la reattività crociata con la proteina endogena in queste specie deve essere validata nelle vostre condizioni sperimentali.
• Nelle applicazioni ELISA, le condizioni di rivestimento ottimali e gli intervalli di rilevazione devono essere determinati empiricamente utilizzando come standard l'immunogeno peptidico o la proteina ricombinante full-length.

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