Anticorpo policlonale coniglio anti-Raf1 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P04049

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Raf1

• RAF1 (noto anche come c-Raf, Raf-1) è una chinasi proteina serina/treonina che funge da collegamento critico tra le GTPasi Ras associate alla membrana e la cascata MAPK/ERK, regolando la proliferazione cellulare, la differenziazione, l'apoptosi e la sopravvivenza.
• L'attivazione di RAF1 avvia una cascata di fosforilazione attraverso MEK1/2 ed ERK1/2, controllando infine la trascrizione dei geni coinvolti nella progressione del ciclo cellulare e nella trasformazione.
• RAF1 fosforila molteplici bersagli a valle inclusi BAD (a Ser-75), adenil ciclasi (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A, TNNT2 e modula la segnalazione NF-kB, la motilità, l'apoptosi, la proliferazione e l'angiogenesi.
• Localizzazione subcellulare: RAF1 si trova nel citoplasma, nella membrana cellulare, nel mitocondrio e nel nucleo, con il translocazione al mitocondrio che media effetti anti-apoptotici tramite legame con BCL2.
• Specificità tessutale: Nel muscolo scheletrico, l'isoforma 1 è più abbondante dell'isoforma 2.
• Modificazioni post-traduzionali: RAF1 subisce fosforilazione a Ser-338 e Ser-339 da parte di PAK1 ed è soggetta a metilazione, legame metallico (zinco) e splicing alternativo, dando origine a molteplici isoforme.
• Associato a malattie: Mutazioni e disregolazione di RAF1 sono collegate a cardiomiopatie (CMD1NN) e sordità, sottolineando il suo ruolo in diversi processi fisiologici.
• Ruoli biologici chiave: Agisce come proto-oncogene, regolando la guarigione delle ferite, la trasformazione delle cellule epiteliali e la soppressione dell'apoptosi.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per il Western blotting, l'anticorpo rileva una banda a ~73 kDa. Si raccomandano controlli positivi come lisati cellulari di HeLa, HEK293 o Jurkat.
• Nell'immunoistochimica, potrebbe essere richiesto il recupero dell'antigene; considerare di testare sia i metodi indotti dal calore che quelli enzimatici su tessuti inclusi in paraffina.
• Per l'immunofluorescenza, includere la permeabilizzazione con Triton X-100 e utilizzare anticorpi secondari appropriati; notare che Raf1 si localizza nel citoplasma, nella membrana e nel nucleo.
• L'immunogeno copre gli amminoacidi 190-350, che possono riconoscere molteplici isoforme di Raf1; si raccomanda la validazione nelle specie pertinenti (umano, topo, ratto).
• Essendo un anticorpo policlonale, può verificarsi variabilità lotto-per-lotto; verificare le prestazioni nell'assay previsto con controlli appropriati.

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