Anticorpo policlonale coniglio anti-RAG1 per WB, ELISA - P15918

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RAG1

• RAG1 (proteina 1 di attivazione della ricombinazione, nota anche come RAG-1 e RNF74) è il componente catalitico del complesso RAG, essenziale per la ricombinazione V(D)J che assembla geni diversificati di immunoglobuline e recettori delle cellule T nei linfociti in via di sviluppo.
• Si lega direttamente alle sequenze segnale di ricombinazione conservate (RSS) e catalizza rotture a doppia elica del DNA sito-specifiche attraverso un meccanismo in due fasi: incisione iniziale a monte dell'eptamero, seguita dalla formazione di hairpin tramite transesterificazione, creando estremità di segnale smussate ed estremità codificanti a hairpin. RAG2 è richiesto per tutte le attività catalitiche.
• Oltre all'attività endonucleasica, RAG1 funge da ligasi E3 ubiquitina-proteica che monoubiquitina l'istone H3 in siti sconosciuti, una modifica richiesta per la fase di giunzione della ricombinazione V(D)J. Inoltre, la trimetilazione di H3 alla Lys-4 (H3K4me3) stimola entrambe le fasi di clivaggio.
• RAG1 si localizza nel nucleo, dove interagisce con la cromatina per mediare gli eventi di ricombinazione.
• La sua espressione è limitata alle cellule linfoidi in maturazione, coerente con il suo ruolo nello sviluppo dei linfociti.
• RAG1 partecipa anche all'esclusione allelica nelle cellule pre-B inducendo il riposizionamento dipendente da ATM di un allele immunoglobulinico verso l'eterocromatina pericentromerica, prevenendo la ricombinazione del secondo allele e garantendo la clonalità.
• La proteina subisce splicing alternativo e la sua natura multifunzionale è sottolineata da parole chiave come legame al DNA, endonucleasi, idrolasi, legame ai metalli (dito di zinco), transferasi, coniugazione ubl e varianti di malattia legate a gravi immunodeficienze combinate (SCID).

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre la regione N-terminale (amminoacidi 1-270) di RAG1 umano, che include il dominio di legame al DNA. Questa regione può rilevare multiple isoforme derivanti dallo splicing alternativo.
• Per il Western blotting, il peso molecolare previsto è di ~119 kDa. Si consiglia l'utilizzo di un gel SDS-PAGE al 6-8% e tempi di trasferimento prolungati per proteine ad alto peso molecolare.
• I protocolli ELISA possono utilizzare rivestimenti con proteina RAG1 ricombinante o peptidi; validare le condizioni del saggio nella matrice del campione per garantire la specificità.
• È prevista reattività crociata con il mouse; validare le prestazioni in tessuti o linee cellulari linfoidi di mouse se utilizzati in questi sistemi.
• Gli estratti proteici da linee cellulari linfoidi umane o murine (es. Jurkat, Raji, EL4) sono probabilmente adatti come controlli positivi; le linee cellulari non linfoidi possono fungere da controlli negativi.

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