Anticorpo policlonale di coniglio anti-RALGPS1 per WB ed ELISA - Q5JS13

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di RALGPS1

• Codifica un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) che attiva specificamente la piccola GTPasi RALA catalizzando lo scambio GDP/GTP, regolando così le cascate di segnalazione a valle.
• È noto anche come RalGEF2 e RalGPS1A; la proteina contiene un dominio PH e un motivo di legame per SH3, caratteristiche dei membri della famiglia RalGEF, che facilitano il targeting alla membrana e le interazioni proteina-proteina.
• Il gene RALGPS1 è soggetto a splicing alternativo, producendo almeno due isoforme principali con distinti pattern di distribuzione tissutale.
• L'isoforma 1 è espressa prevalentemente nel cuore e nei testicoli, con livelli inferiori nel cervello, nel pancreas, nel muscolo scheletrico, nell'intestino tenue e nel timo; l'isoforma 2 è espressa più ampiamente nel cervello, nel colon, nel rene, nel pancreas, nella prostata, nel muscolo scheletrico, nell'intestino tenue, nei testicoli, nel timo e nell'utero.
• Gli studi sulla localizzazione subcellulare mostrano la presenza di RALGPS1 sia nel citoplasma sia sulla membrana cellulare, in linea con il suo ruolo nella regolazione spaziale della segnalazione di RALA.
• È presumibilmente coinvolta nell'organizzazione del citoscheletro, suggerendo una funzione nella forma cellulare, nella motilità o nel traffico intracellulare (per similarità).
• Gli studi strutturali (struttura 3D) hanno fornito informazioni sul meccanismo catalitico del dominio Sec7, sottolineandone l'importanza come fattore di rilascio dei nucleotidi della guanina.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 1–300 di RALGPS1 umano (NP_055451.1), una regione che può essere conservata tra le isoforme; pertanto, l'anticorpo può rilevare più varianti di splicing. Considerare il blocco con peptide o controlli specifici per isoforma per confermare la specificità.
• Nel western blot, RALGPS1 endogena migra a circa 62 kDa. Assicurarsi di effettuare una lisi cellulare completa e considerare protocolli di arricchimento delle proteine di membrana, poiché la proteina si associa alla membrana plasmatica.
• Quando si esegue l'ELISA, utilizzare una curva standard generata con il frammento di immunogeno ricombinante per una stima quantitativa e validare il test utilizzando lisati di cellule o tessuti umani.
• Data l'ampia espressione tissutale, validare l'anticorpo su un pannello di tessuti umani (ad es. cuore, testicoli, cervello) per confermare il pattern delle bande atteso.
• Poiché RALGPS1 è un GEF, gli esperimenti di co-immunoprecipitazione possono essere abbinati al WB per studiare la sua interazione con RALA; tuttavia, si raccomanda l'ottimizzazione empirica dei tamponi di lisi.

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