Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-RANKL per WB, IF/ICC, ELISA - O14788

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di RANKL (TNFSF11)

• RANKL (Ligando attivatore del recettore del fattore nucleare kappa-B), anche designato TNFSF11, ODF, OPGL e TRANCE, è una proteina transmembrana di tipo II appartenente alla superfamiglia dei ligandi del fattore di necrosi tumorale (TNF).
• Come citochina, è un regolatore principale della differenziazione e attivazione degli osteoclasti legandosi al suo recettore RANK (TNFRSF11A) e al recettore esca OPG (TNFRSF11B), controllando così il rimodellamento osseo.
• RANKL potenzia la capacità delle cellule dendritiche di stimolare la proliferazione delle cellule T naive ed è implicato nella regolazione delle interazioni tra cellule T e cellule dendritiche, suggerendo un ruolo nell'immunità adattativa.
• Promuove il riassorbimento osseo patologico nell'ipercalcemia umorale della malignità, sottolineando la sua importanza nelle malattie ossee associate al cancro. Riferimenti correlati: PMID:22664871
• RANKL innesca l'osteoclastogenesi tramite cascate di segnalazione che generano oscillazioni intracellulari sostenute di Ca2+, portando all'attivazione di NFATC1, alla sua traslocazione nucleare e all'induzione della trascrizione di geni specifici degli osteoclasti.
• La proteina si localizza sulla membrana cellulare, nel citoplasma e può essere secreta in una forma solubile (sRANKL) attraverso splicing alternativo o clivaggio proteolitico.
• L'espressione più elevata si trova nei linfonodi periferici, con livelli da moderati a bassi in milza, leucociti del sangue periferico, midollo osseo, cuore, placenta, muscolo scheletrico, stomaco e tiroide.
• Le modificazioni post-traduzionali includono glicosilazione N-linked e la molecola esiste sia in isoforme ancorate alla membrana che solubili, regolate da splicing alternativo e "shedding".

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 78–317 di RANKL umano, che includono il dominio di omologia TNF extracellulare; pertanto, ci si aspetta che questo anticorpo rilevi sia le forme legate alla membrana che quelle solubili (sRANKL).
• Per il Western blotting, considerare l'uso di lisati da tessuti con alta espressione di RANKL come linfonodi o cellule T attivate e validare in condizioni riducenti per osservare la banda a ~35 kDa.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica, potrebbe essere necessaria un'adeguata permeabilizzazione per la rilevazione citoplasmatica; studi di co-localizzazione con marcatori di membrana possono aiutare a confermare la distribuzione subcellulare.
• Per l'ELISA, questo anticorpo può essere adatto come reagente di cattura o di rilevamento per quantificare sRANKL in surnatanti di coltura cellulare o fluidi biologici; convalidare sempre incrociatamente con una curva standard caratterizzata nel proprio specifico matrice.
• La reattività incrociata con topo e ratto è stata annotata; tuttavia, le diluizioni di lavoro ottimali e la validazione specifica per specie dovrebbero essere eseguite empiricamente nel sistema di campioni rilevante.

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