Anticorpo policlonale di coniglio anti-RASSF1 per WB ed ELISA - Q9NS23

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di RASSF1

• RASSF1 è un potenziale soppressore tumorale necessario per l'apoptosi dipendente dai recettori della morte. Media l'attivazione di STK3/MST2 e STK4/MST1 durante l'apoptosi indotta da Fas, impedendone la defosforilazione.
• In seguito all'associazione con MOAP1, RASSF1 promuove il cambiamento conformazionale di BAX e la sua traslocazione alle membrane mitocondriali in risposta alla stimolazione con TNF e TNFSF10.
• L'isoforma A interagisce con CDC20, un attivatore del complesso promotore dell'anafase (APC), inibendo l'attività dell'APC e la progressione mitotica. Inibisce inoltre la proliferazione regolando l'accumulo della ciclina D1 durante la transizione dalla fase G1 alla fase S.
• L'isoforma A interrompe l'interazione MDM2-DAXX-USP7, promuovendo l'auto-ubiquitinazione di MDM2 e contribuendo all'efficiente attivazione di TP53 nel controllo dei checkpoint del ciclo cellulare a seguito di danni al DNA.
• La proteina è localizzata nel citoplasma, nel citoscheletro (inclusi microtubuli, centrosoma, fuso e polo del fuso) e nel nucleo.
• Le isoforme A e C sono espresse ubiquitariamente in tutti i tessuti analizzati, ma l'isoforma A è frequentemente assente nelle linee cellulari tumorali. L'isoforma B è espressa principalmente nelle cellule ematopoietiche.
• Le principali modifiche post-traduzionali includono acetilazione, metilazione e fosforilazione. La proteina contiene un dominio a dito di zinco e lega lo zinco.
• Lo splicing alternativo e l'utilizzo di promotori alternativi producono molteplici isoforme; inoltre, il gene è soggetto a silenziamento epigenetico in numerosi tumori.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 101–340 di RASSF1 umano (isoforma A) e comprende domini funzionali critici. Si consiglia di verificare la specificità per l'isoforma utilizzando controlli positivi che esprimano varianti note di RASSF1.
• Per l'analisi mediante Western blot, i lisati cellulari totali ottenuti da tessuti o linee cellulari umani o murini che esprimono RASSF1 dovrebbero mostrare una banda intorno a 39 kDa. Si noti che le modifiche post-traduzionali possono causare lievi variazioni nella mobilità elettroforetica.
• Per l'ELISA, l'utilizzo come antigene di rivestimento della proteina ricombinante o di un peptide derivato dalla regione dell'immunogeno può contribuire a confermare il riconoscimento da parte dell'anticorpo. Validare le condizioni del saggio con controlli positivi e negativi appropriati.
• Poiché RASSF1 è frequentemente silenziato dalla metilazione del promotore nei tumori, prima della preparazione dei lisati può essere necessario trattare le cellule con agenti demetilanti (ad esempio, 5-aza-2'-desossicitidina) per consentirne il rilevamento in determinate linee cellulari.
• È stato dimostrato che questo anticorpo reagisce con campioni umani e murini; la reattività crociata con altre specie deve essere determinata empiricamente.

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