Anticorpo policlonale anti-RB per WB, IF/ICC, ELISA - P06400

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di RB

• RB (proteina associata al retinoblastoma) è un oncosoppressore e un regolatore chiave della transizione G1/S del ciclo cellulare. La forma ipofosforilata si lega ai fattori di trascrizione E2F, reprimendo la trascrizione dei geni necessari per l'ingresso nella fase S. La fosforilazione dipendente da ciclina/CDK rilascia gli E2F, innescando la progressione del ciclo cellulare (PubMed:10499802). RB promuove anche la transizione G0-G1 tramite fosforilazione da parte di CDK3/ciclina-C (PubMed:15084261).

  Riferimenti correlati: PMID:10499802 PMID:15084261

• Coinvolta direttamente nella formazione dell'eterocromatina stabilizzando la metilazione degli istoni e reclutando le iston metiltransferasi SUV39H1, KMT5B e KMT5C. Controlla la trimetilazione della lisina-20 dell'istone H4, portando alla repressione trascrizionale epigenetica.

• Media la repressione trascrizionale da parte di SMARCA4/BRG1 tramite il reclutamento di un complesso di iston deacetilasi (HDAC) sul promotore c-FOS. Nei neuroni a riposo, un complesso repressore phospho-RB1-HDAC1 inibisce la trascrizione di c-FOS; l'afflusso di calcio defosforila RB1 tramite la calcineurina, rilasciando la repressione.

• La localizzazione subcellulare include il nucleo e il citoplasma.

• Espressa nella retina e nei cheratinociti del prepuzio (a livello proteico) (PubMed:20940255).

  Riferimenti correlati: PMID:20940255

• Soggetta a modifiche post-traduzionali chiave: acetilazione, metilazione ed estesa fosforilazione che ne regolano l'attività e le interazioni.

• Durante l'infezione virale, l'antigene T grande di SV40, la proteina E7 di HPV o la proteina E1A dell'adenovirus si legano a RB1, interrompendo il complesso RB1-E2F1 e annullando la sua funzione oncosoppressiva.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione C-terminale (aa 701-928), che è ben conservata e probabilmente genererà reattività contro l'RB a lunghezza intera (~106 kDa).
• Per il Western blot, utilizzare un ladder proteico di fascia media per risolvere chiaramente la banda da 106 kDa. Si raccomandano estratti nucleari per una rilevazione ottimale dell'RB endogeno. Validare l'anticorpo in linee cellulari umane rilevanti (ad esempio, quelle con stato RB noto) e considerare un controllo con peptide bloccante se si osserva rumore di fondo.
• In IF/ICC, ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione; la fissazione in metanolo può preservare meglio gli epitopi nucleari di RB. Per l'ELISA, l'immunogeno ricombinante può fungere da controllo positivo.
• Essendo un anticorpo policlonale prodotto nel coniglio, la coerenza tra i lotti può variare. Includere controlli appropriati e validare ogni nuovo lotto.

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