Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-REST/NRSF per WB, IP, ELISA - Q13127

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di REST/NRSF

• REST/NRSF è un repressore trascrizionale a dito di zinco che si lega all'elemento di silenziamento neuronale restrittivo (NRSE) e silenzi l'espressione dei geni neuronali nelle cellule non neuronali. Riferimenti correlati: PMID:11741002 PMID:11779185 PMID:12399542
• Recluta i corepressori SIN3A e RCOR1, che a loro volta reclutano istone deacetilasi, e media anche la repressione tramite il complesso BHC attraverso la deacetilazione e la demetilazione delle istoni, portando alla compattazione della cromatina. Riferimenti correlati: PMID:10449787 PMID:10734093
• REST può anche reprimere la trascrizione reclutando CDYL e la metiltransferasi delle istoni EHMT2, un processo potenzialmente importante per la soppressione della trasformazione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:19061646
• Nelle cellule staminali neurali, REST mantiene la repressione dei geni neuronali, preservando la quiescenza e impedendo la differenziazione prematura. Riferimenti correlati: PMID:21258371
• In condizioni ipossiche, REST agisce come un repressore chiave legandosi direttamente ai siti NRSE sui promotori dei geni bersaglio; media anche la resistenza allo stress nel cervello invecchiato e contribuisce alla morte cellulare neuronale indotta da ischemia, in parte attraverso la repressione di miR-132. Riferimenti correlati: PMID:27531581 PMID:24670762
• Lo splicing alternativo produce isoforme, inclusa una isoforma corta che può eterodimerizzare con REST a lunghezza intera e inibire la sua attività di repressore; lo splicing dipendente da SRRM4 genera un'isoforma REST essenziale per l'udito. Riferimenti correlati: PMID:11741002 PMID:11779185
• REST è prevalentemente nucleare ma può anche essere rilevato nel citoplasma; è una fosfoproteina, soggetta a ubiquitinazione, e contiene domini multipli a dito di zinco.
• È espresso ubiquitariamente, con livelli più elevati nei tessuti linfoide; nel cervello, REST è espresso in popolazioni neuronali specifiche e la sua deplezione nucleare è collegata alla malattia di Alzheimer, alla malattia di Parkinson e alla demenza con corpi di Lewy, dove può accumularsi nei corpi di Lewy. Riferimenti correlati: PMID:8568247 PMID:24670762 PMID:30684677 PMID:26053433

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico derivato dagli amminoacidi 100–200 di REST/NRSF umano; questa regione può essere presente in più isoforme. Considerare l'allineamento delle sequenze per valutare il potenziale riconoscimento delle isoforme.
• Per il western blotting (WB), prevedere una banda intorno a 122 kDa, coerente con il peso molecolare previsto. Le modificazioni post-traduzionali (es. fosforilazione, ubiquitinazione) possono causare lievi spostamenti di migrazione o bande aggiuntive.
• REST è una proteina nucleare; protocolli di estrazione nucleare efficienti o lisati cellulari totali che includono frazioni nucleari possono migliorare il rilevamento in WB e IP.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), il formato monoclonale di coniglio offre tipicamente un'alta specificità e un basso fondo; includere un controllo di isotipo appropriato.
• Nell'ELISA, utilizzare un saggio di blocco con peptidi per verificare il legame specifico; il peptide immunogeno può servire come controllo positivo.
• L'anticorpo mostra reattività incrociata con REST di topo e ratto; validare le condizioni del saggio nella specie prevista, poiché la conservazione dell'epitopo può influenzare le prestazioni.

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