Anticorpo policlonale coniglio anti-REST/NRSF per IF/ICC, ELISA - Q13127

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di REST/NRSF

• REST/NRSF, noto anche come fattore di trascrizione di silenziamento RE1 o fattore di silenziamento neurale restrittivo, è un repressore trascrizionale che si lega agli elementi di silenziamento neurale restrittivi (NRSE) per silenziare i geni neuronali nelle cellule non neuronali. Recluta i corepressori SIN3A e RCOR1, che a loro volta attraggono istone deacetilasi per modificare la cromatina e applicare la repressione. Riferimenti correlati: PMID:11741002, PMID:11779185, PMID:12399542, PMID:10449787, PMID:10734093
• REST recluta il complesso BHC per la deacetilazione e la demetilazione degli istoni e può formare un complesso repressivo con CDYL e l'istone metiltransferasi EHMT2, implicato nella soppressione della trasformazione. Riferimenti correlati: PMID:19061646
• L'isoforma 3 (una variante di splicing più breve) mostra un'attività repressiva più debole e può formare eterodimeri con REST a lunghezza intera, inibendo il suo legame al DNA e il reclutamento di corepressori, thereby derepressing target genes. Questo cambio di isoforma è cruciale per l'udito e l'attivazione dei geni neuronali. Riferimenti correlati: PMID:11779185, PMID:11741002
• REST mantiene lo stato quiescente delle cellule staminali neurali adulte reprimendo i geni neuronali; il suo distacco dai siti NRSE permette la differenziazione in neuroni maturi. Riferimenti correlati: PMID:21258371
• Durante lo sviluppo postnatale, REST reprime l'espressione di GRIN2B, facilitando il passaggio della composizione delle subunità del recettore NMDA sinaptico da GRIN2B a GRIN2A (Per somiglianza).
• In condizioni ipossiche, REST agisce come un repressore chiave legandosi direttamente ai siti RE1/NRSE nei promotori dei geni sensibili all'ossigeno. Riferimenti correlati: PMID:27531581
• REST può conferire resistenza allo stress nel cervello invecchiato regolando i geni coinvolti nella morte cellulare e nelle risposte allo stress. Riferimenti correlati: PMID:24670762
• Nel cancro al seno, REST regola negativamente l'espressione di SRRM3 e la perdita di REST correla con un'aumentata invasività. Riferimenti correlati: PMID:26053433
• Espresso ubiquitariamente, con livelli più elevati nei tessuti linfoidei; nei neuroni della corteccia prefrontale e dell'ippocampo, il nucleare REST diminuisce nella malattia di Alzheimer, nella demenza frontotemporale e nel morbo di Parkinson, localizzandosi spesso erroneamente nei corpi di Lewy. Riferimenti correlati: PMID:24670762, PMID:30684677, PMID:21258371, PMID:26053433, PMID:8568247
• REST si localizza sia nel nucleo che nel citoplasma, contiene nove motivi a dito di zinco di tipo C2H2 ed è regolato da fosforilazione e ubiquitinazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (residui 760–1060) si trova all'interno della regione C-terminale di REST a lunghezza intera (isoforma 1). Si prevede che questo anticorpo riconosca l'isoforma 1; l'isoforma 3 più breve potrebbe non essere rilevata. Validare la reattività nel sistema di campione pertinente.
• Per IF/ICC, ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione. La colorazione nucleare dovrebbe prevalere, ma in determinate condizioni può essere osservato un segnale citoplasmatico.
• Scegliere modelli cellulari appropriati: le linee non neuronali (es. HEK293, HeLa) esprimono REST, mentre i neuroni maturi mostrano tipicamente bassa o assente espressione. Utilizzare il knockdown con siRNA o il blocco peptidico per confermare la specificità.
• Per ELISA, la sequenza immunogenica o REST ricombinante a lunghezza intera può fungere da standard o peptide di blocco. Considerare sia formati di saggio diretti che indiretti.
• Essendo un anticorpo policlonale, verificare la coerenza da lotto a lotto quando si passa tra lotti per esperimenti critici.

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