Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Rev-Erbα/NR1D1 per WB, IF/ICC, IF-P, ELISA - P20393

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Rev-Erbα/NR1D1

• Rev-Erbα (NR1D1) è un recettore nucleare legante l'eme che agisce come repressore trascrizionale, formando un braccio negativo critico dell'orologio circadiano reprimendo direttamente geni dell'orologio centrale come BMAL1, CLOCK e CRY1.
• Regola diverse vie metaboliche, incluso il metabolismo di lipidi e acidi biliari, adipogenesi, gluconeogenesi e risposte infiammatorie, in modo eme-dipendente reclutando il complesso corepressore NCOR1/HDAC3.
• La proteina si lega al DNA come monomero agli elementi RevRE (consenso 5'-[A/G]GGTCA-3' con una sequenza 5' ricca in A/T) o come omodimero agli elementi RevDR-2 (ripetizioni dirette separate da due nucleotidi).
• Rev-Erbα compete con RORα per il legame al DNA e reprime PPARGC1A, controllando così la sintesi dell'eme e l'espressione ritmica degli enzimi metabolici.
• A livello subcellulare, NR1D1 è principalmente nucleare ma si localizza anche nel citoplasma e si trova nelle spine dendritiche, in linea con il suo ruolo nelle funzioni neuronali.
• Ampiamente espresso con alti livelli in fegato, tessuto adiposo, muscolo scheletrico, cervello e macrofagi; l'espressione oscilla diurnamente nel nucleo soprachiasmatico e nei tessuti periferici.
• Le principali modificazioni post-traduzionali includono fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione, che ne modulano stabilità e attività; la degradazione mediata dall'ubiquitina allevia la repressione infiammatoria in risposta a stimoli.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 280–360 all'interno del dominio di legame del ligando; questa regione può conferire specificità per la conformazione del recettore e le interazioni eme-dipendenti.
• Per il Western blotting, il peso molecolare previsto è 67 kDa; verificare la dimensione della banda nei campioni rilevanti, poiché l'espressione endogena può variare con l'ora circadiana e il tipo di tessuto.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), prevedere una colorazione prevalentemente nucleare; tuttavia, nelle cellule neuronali si può osservare localizzazione citoplasmatica e dendritica, quindi ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione.
• Per applicazioni ELISA, considerare l'accoppiamento con un sistema di rilevamento che riconosca la regione Fc delle IgG di coniglio se si utilizza questo anticorpo primario in formato indiretto.
• Quando si lavora con Rev-Erbα, notare che la sua espressione e attività sono regolate ritmicamente; raccogliere i campioni a punti temporali circadiani consistenti per garantire la riproducibilità.
• L'anticorpo reagisce in modo incrociato con topo e ratto, quindi può essere utilizzato per studi comparativi tra specie; convalidare nella specie desiderata con controlli appropriati.

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