Anticorpo policlonale di coniglio anti-rodopsina per WB, IHC-P, ELISA - P08100

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della rodopsina

• La rodopsina (nota anche come opsina-2) è una proteina fotorecettrice accoppiata a proteine G, codificata dal gene RHO nell'uomo, essenziale per la visione in condizioni di scarsa illuminazione.
• Funziona attivando la cascata di segnalazione della proteina G transducina (Gt) in seguito all'assorbimento di fotoni da parte del suo cromoforo 11-cis-retinale legato covalentemente, che viene isomerizzato in tutto-trans-retinale, inducendo un cambiamento conformazionale che avvia la fototrasduzione. Riferimenti correlati: PMID:6140680 PMID:7846071 PMID:8107847
• Questo recettore è necessario per la vitalità delle cellule fotorecettrici dopo la nascita ed è fondamentale per la formazione dei segmenti esterni dei bastoncelli. Riferimenti correlati: PMID:12566452 PMID:2215617
• La terminazione del segnale avviene attraverso la fosforilazione del recettore, che promuove il legame dell'arrestina (SAG) e lo spiazzamento della subunità alfa della proteina G. Riferimenti correlati: PMID:26200343
• La rodopsina è localizzata esclusivamente nella membrana dei segmenti esterni dei fotorecettori, dove costituisce la principale componente proteica dei dischi delle cellule a bastoncello.
• La proteina è sottoposta a diverse modificazioni post-traduzionali, tra cui acetilazione, palmitoilazione, fosforilazione e glicosilazione, e contiene un legame disolfuro essenziale; lega il cromoforo retinale e uno ione di zinco.
• È espressa specificamente nelle cellule fotorecettrici a forma di bastoncello, che mediano la visione scotopica (in condizioni di scarsa illuminazione).
• Le mutazioni di RHO sono associate a malattie retiniche quali la retinite pigmentosa e la cecità notturna congenita stazionaria.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente alla regione C-terminale (amminoacidi 200–348) della rodopsina umana (NP_000530.1). Questa regione è relativamente conservata, il che può contribuire alla reattività crociata riportata con mouse e ratto.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto della rodopsina umana non modificata è di circa 39 kDa; tuttavia, la glicosilazione e altre modificazioni possono causare spostamenti delle bande. Includere controlli positivi appropriati (ad esempio, lisato di tessuto retinico) e considerare la natura di proteina di membrana del target.
• Per l'immunoistochimica (paraffina), le condizioni di recupero antigenico devono essere ottimizzate per le sezioni retiniche; il segnale è atteso nei segmenti esterni dei fotorecettori. Si raccomandano il blocco della perossidasi endogena e un'adeguata fissazione dei tessuti.
• Le applicazioni ELISA possono richiedere saggi di competizione con il peptide per confermare la specificità; considerare il rivestimento con il peptide immunogeno o con la proteina ricombinante.
• Come per qualsiasi anticorpo policlonale, è possibile una variabilità tra lotti; validare i nuovi lotti nel sistema di campioni pertinente prima dell'uso su larga scala.

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