Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-RhoGAP (p190-B) per WB, IP, ELISA - Q13017

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di RhoGAP

• La proteina 5 di attivazione della GTPasi Rho (ARHGAP5, nota anche come p190-B, RhoGAP5) è un membro della famiglia RhoGAP che funge da proteina di attivazione della GTPasi (GAP) per le piccole GTPasi della famiglia Rho, potenziando la loro attività intrinseca di idrolisi del GTP per terminare la segnalazione (PubMed:8537347). Riferimenti correlati: PMID:8537347
• La proteina subisce splicing alternativo, generando multiple isoforme che possono mostrare espressione tessuto-specifica e diversità funzionale.
• ARHGAP5 è localizzato principalmente nel citoplasma e può associarsi alla membrana cellulare, coerente con il suo ruolo nella regolazione delle GTPasi Rho nei siti di segnalazione prossimi alla membrana.
• La proteina è una fosfoproteina e la sua attività può essere modulata dalla fosforilazione della tirosina, collegandola alle vie di segnalazione dei fattori di crescita e delle integrine.
• È rilevato specificamente a livello proteico nei fibroblasti della pelle, suggerendo un ruolo nella biologia dei fibroblasti e possibilmente nella guarigione delle ferite o nel rimodellamento del tessuto connettivo.
• Parole chiave da UniProt: struttura-3D, Splicing alternativo, Membrana cellulare, Citoplasma, Attivazione GTPasi, Membrana, Nitrazione, Fosfoproteina, Identificazione proteomica, Proteoma di riferimento, Ripetizione. Queste evidenziano le sue caratteristiche strutturali e regolatorie.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli aminoacidi 1150–1300 di RhoGAP umano (Q13017), una regione che potrebbe essere ben conservata tra le specie (cross-reattività con topo e ratto). Validare la specificità nella specie pertinente mediante allineamento delle sequenze o analisi Western blot iniziale.
• Per il Western blotting, il peso molecolare previsto è di ~172 kDa. Utilizzare percentuali di gel appropriate (es. 6–8% SDS-PAGE) e controlli di carico. Confermare la specificità della banda utilizzando lisati di controllo positivo (es. lisati di fibroblasti della pelle, basandosi sui dati di espressione tissutale).
• Negli esperimenti di immunoprecipitazione (IP), ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo mediante titolazione e includere appropriati controlli IgG. Considerare il cross-linking dell'anticorpo alle perle per ridurre l'interferenza della catena pesante nella successiva rilevazione WB.
• Per l'ELISA, abbinare con un anticorpo di rilevamento corrispondente o utilizzare come anticorpo di cattura a seconda del formato del saggio. Validare con la proteina RhoGAP ricombinante o lisati cellulari che esprimono il bersaglio.
• Dato che l'anticorpo è monoclonale (coniglio), ci si aspetta una prestazione coerente tra lotti. Tuttavia, rivalidare ogni nuovo lotto nella vostra applicazione specifica e sistema di campioni.

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