Anticorpo monoclonale di coniglio anti-RNF8 per WB, IHC-P, ELISA - O76064

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di RNF8

• La ligasi E3 dell'ubiquitina-proteina RNF8 (RING finger protein 8) è un mediatore chiave della risposta al danno del DNA, reclutato nelle rotture a doppio filamento da MDC1 fosforilata da ATM, dove catalizza l'ubiquitinazione degli istoni H2A e H2AX legata a 'Lys-63', facilitando l'assemblaggio di proteine di riparazione del DNA come BRCA1 e TP53BP1 nei foci indotti dalle radiazioni ionizzanti.
  Riferimenti correlati: PMID:18001824, PMID:18006705
• RNF8 promuove il reclutamento del complesso dell'anemia di Fanconi e di fattori come FAAP20 nei legami crociati interfilamento del DNA mediando l'ubiquitinazione di H2A/H2AX e coordina inoltre il silenziamento trascrizionale dipendente da ATM in prossimità delle rotture a doppio filamento, per prevenire collisioni tra trascrizione e riparazione.
• Attraverso interazioni distinte con gli enzimi E2, RNF8 può formare catene di poliubiquitina legate a 'Lys-48' (ad esempio con UBE2L6), determinando la degradazione proteasomica di substrati come CHEK2, JMJD2A/KDM4A e KU80/XRCC5, modulando così la scelta della via di riparazione e l'accessibilità della cromatina.
  Riferimenti correlati: PMID:11322894, PMID:14981089, PMID:17724460
• Contribuisce alla decondensazione della cromatina di ordine superiore e attiva indirettamente la chinasi ATM promuovendo l'ubiquitinazione dell'istone H2B, che innesca l'acetilazione di H4K16.
• RNF8 è essenziale per la spermatogenesi, guidando la sostituzione degli istoni durante la maturazione degli spermatozoi, e partecipa alla ricombinazione con cambio di classe nel sistema immunitario attraverso il suo ruolo nella riparazione delle rotture a doppio filamento.
  Riferimenti correlati: PMID:22865450
• La proteina è localizzata prevalentemente nel nucleo, con un'ulteriore presenza nel citoplasma, nel corpo intermedio e nei telomeri, in linea con i suoi molteplici ruoli nella progressione del ciclo cellulare e nella stabilità del genoma.
• L'espressione tissutale è ubiquitaria, con livelli più elevati nel cervello, nel timo e nel fegato durante lo sviluppo fetale e nel cervello e nei testicoli negli adulti, sottolineandone l'ampia importanza nella riparazione del DNA e nella regolazione della cromatina.
• La proteina RNF8 contiene un dominio RING finger ed è classificata come fosfoproteina, con un peso molecolare di ~55,5 kDa (UniProt: 55518 Da). Le parole chiave evidenziano inoltre il suo coinvolgimento nelle interazioni ospite-virus, nel legame dei metalli (zinco) e nella coniugazione dell'ubiquitina.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde ai primi 1–260 amminoacidi N-terminali di RNF8 umano; pertanto, l'anticorpo può riconoscere epitopi nella regione N-terminale, incluso il dominio FHA, coinvolto nelle interazioni dipendenti dalla fosforilazione.
• Per il Western blot, si prevede che RNF8 migri a un peso molecolare apparente di ~56 kDa nei lisati cellulari umani, murini e di ratto; utilizzare controlli positivi e negativi appropriati per confermare la specificità.
• Per IHC-P, prendere in considerazione l'ottimizzazione del recupero antigenico (ad es., tampone citrato, pH 6,0) e validare in tessuti con espressione nota di RNF8, come testicolo o cervello.
• Per l'ELISA, gli utenti finali dovrebbero determinare le concentrazioni ottimali di rivestimento e le condizioni di rilevazione utilizzando l'antigene ricombinante o tipologie di campioni pertinenti.
• È stata segnalata reattività crociata con RNF8 murino e di ratto; verificare le prestazioni nei sistemi modello pertinenti prima dell'uso di routine.

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