Anticorpo monoclonale di coniglio anti-ROCK1 per WB, ELISA - Q13464

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di ROCK1

• ROCK1 è una serina/treonina-proteina chinasi che agisce come regolatore principale del citoscheletro di actina, guidando processi essenziali come la polarità cellulare, la contrazione della muscolatura liscia, la formazione di fibre da stress e adesioni focali, la retrazione dei neuriti, l'adesione cellulare e la motilità. Questi effetti sono mediati attraverso la fosforilazione di diversi substrati, tra cui DAPK3, GFAP, LIMK1, LIMK2, MYL9/MLC2, TPPP, PFN1 e PPP1R12A (PubMed:10436159, PubMed:10652353, PubMed:11018042). Riferimenti correlati: PMID:10436159 PMID:10652353 PMID:11018042

• La fosforilazione di FHOD1 da parte di ROCK1 promuove sinergicamente il blebbing della membrana plasmatica non apoptotico SRC-dipendente (PubMed:18694941). Riferimenti correlati: PMID:18694941

• Sotto stress da UVB, ROCK1 fosforila JIP3 e modula il conseguente reclutamento di JNK, controllando la segnalazione di stress a valle (PubMed:19036714). Riferimenti correlati: PMID:19036714

• ROCK1 regola negativamente l'attivazione delle cellule endoteliali angiogeniche indotta da VEGF, limitando così l'eccessiva angiogenesi (PubMed:19181962). Riferimenti correlati: PMID:19181962

• ROCK1 è coinvolta nei processi di differenziazione terminale, contribuendo alla differenziazione eritroide (PubMed:21072057) e promuovendo la differenziazione terminale dei cheratinociti (PubMed:19997641). Riferimenti correlati: PMID:21072057 PMID:19997641

• A livello subcellulare, ROCK1 è distribuita ampiamente nel citoplasma, nel citoscheletro (centrosoma/centriolo), nella membrana dell'apparato di Golgi, nella membrana cellulare e nelle proiezioni cellulari dinamiche, inclusi bleb, lamellipodi e increspature. È rilevata nelle piastrine del sangue.

• Strutturalmente, ROCK1 contiene un dominio chinasico, una regione coiled-coil e motivi a dita di zinco; la sua attività è modulata da fosforilazione e acetilazione.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Per il western blotting, notare che la ROCK1 a lunghezza intera ha un peso molecolare previsto di circa 158 kDa. Selezionare la percentuale di gel di poliacrilammide appropriata (es. 6–8%) e ottimizzare le condizioni di trasferimento per proteine ad alto peso molecolare. Si consiglia di validare la specificità della banda utilizzando saggi di competizione peptidica o knockdown mediato da siRNA.
• Questo anticorpo è confermato per la reattività con campioni umani, di topo e di ratto; quando si utilizzano lisati di altre specie, la reattività crociata dovrebbe essere verificata sperimentalmente.
• Per le applicazioni ELISA, si raccomanda di accoppiare l'anticorpo con un anticorpo di rilevamento corrispondente e di stabilire la linearità e la sensibilità del saggio standard con proteina ROCK1 ricombinante o campioni biologici rilevanti.
• Dato il design dell'immunogeno (un peptide all'interno dei residui 1100–1200), considerare che l'epitopo si trova all'interno della regione C-terminale; condizioni denaturanti o proteolisi parziale potrebbero influenzare l'efficienza di rilevamento.

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