Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-Rpb1 CTD per WB, IF/ICC, IHC-P, ChIP, ELISA - P24928

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di Rpb1 CTD

• POLR2A codifica Rpb1, la subunità catalitica più grande della RNA polimerasi II dipendente dal DNA (Pol II), responsabile della sintesi dei precursori di mRNA e degli RNA non codificanti. L'enzima utilizza il DNA come stampo e ribonucleosidi trifosfati per polimerizzare l'RNA, procedendo attraverso le fasi di inizio, allungamento e terminazione. (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596, PubMed:28108474, PubMed:8381534, PubMed:9852112) Riferimenti correlati: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:28108474, PMID:8381534, PMID:9852112
• Il CTD di Rpb1, contenente 52 ripetizioni tandem di eptapeptidi, funge da impalcatura per i regolatori della trascrizione. La fosforilazione su Ser5 (Ser5P) facilita l'uscita dal promotore, mentre la fosforilazione su Ser2 (Ser2P) è necessaria per il rilascio della pausa e l'allungamento. Inoltre, l'acetilazione della lisina del CTD regola l'induzione dei geni a risposta immediata, mentre la metilazione/dimetilazione generalmente reprime l'espressione dei geni bersaglio. (PubMed:24207025, PubMed:26124092) Riferimenti correlati: PMID:24207025, PMID:26124092
• Rpb1 possiede un'attività esonucleasica 3'→5' che prova a leggere l'RNA nascente, consentendo il backtracking e la scissione dei nucleotidi incorporati erroneamente. (PubMed:8381534) Riferimenti correlati: PMID:8381534
• Oltre al suo ruolo dipendente dal DNA, Rpb1 exhibits attività di RNA polimerasi dipendente da RNA, estendendo gli RNA non codificanti utilizzando uno stampo interno, e può replicare il genoma del virus dell'epatite delta quando associato all'antigene delta piccolo virale.
• Rpb1 si localizza principalmente nel nucleo, dove avviene la trascrizione, ma è stato rilevato anche nel citoplasma e sui cromosomi, coerente con i suoi ruoli nella trascrizione e potenziali funzioni extranucleari.
• Le modifiche post-traduzionali su Rpb1 includono fosforilazione, acetilazione, metilazione, ubiquitinazione e sumoilazione, regolando dinamicamente la sua attività e le sue interazioni.
• Lo splicing alternativo di POLR2A produce multiple isoforme, sebbene le differenze funzionali debbano essere ancora completamente chiarite.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 1611-1710 all'interno del CTD, suggerendo che l'anticorpo rileva il Rpb1 totale o un epitopo specifico del CTD; verificare la reattività dipendente dalla fosforilazione utilizzando campioni trattati con fosfatasi.
• Per il Western blotting, la proteina Rpb1 a lunghezza intera è prevista a ~217 kDa; bande aggiuntive (es. ~64 kDa) possono rappresentare isoforme o prodotti di degradazione; convalidare con controlli appropriati.
• Questo anticorpo è stato utilizzato in saggi ChIP; ottimizzare le condizioni di crosslinking e frammentazione della cromatina per i tuoi loci bersaglio specifici.
• Per l'immunofluorescenza, ci si aspetta una colorazione nucleare; eseguire una colorazione simultanea con un marcatore citoplasmatico per confermare la localizzazione.

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