Anticorpo policlonale di coniglio anti-RRM1 per WB, IF/ICC, IP, ELISA - P23921

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di RRM1

• RRM1 è la subunità grande della ribonucleotide reduttasi (RNR), un enzima eterodimerico fondamentale per la sintesi de novo dei difosfati dei desossiribonucleosidi (dNDP) a partire dai difosfati dei ribonucleosidi (rNDP), fornendo i precursori monomerici necessari per la replicazione e la riparazione del DNA.
• Funziona come un enzima allosterico, con attività regolata dal legame all'ATP e specificità per il substrato nucleotidico controllata dal legame di dATP, dGTP o dTTP al sito di specificità.
• RRM1 deve formare un complesso con una subunità piccola (RRM2 o p53R2) per costituire l'oloenzima attivo; la subunità grande contribuisce ai siti catalitici e di regolazione allosterica.
• A livello subcellulare, RRM1 è principalmente citoplasmatica, dove avvengono il metabolismo dei nucleotidi e la sintesi dei precursori del DNA.
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione e fosforilazione, che possono modulare l'attività enzimatica, la stabilità o le interazioni proteina-proteina.
• Le mutazioni in RRM1 sono associate a sindromi da deplezione del DNA mitocondriale autosomiche recessive, inclusa l'oftalmoplegia esterna progressiva, evidenziando il suo ruolo essenziale nel mantenimento di riserve equilibrate di dNTP per la sintesi del DNA mitocondriale.
• La proteina appartiene alla famiglia di classe I della ribonucleotide reduttasi e condivide l'omologia strutturale con le subunità grandi della RNR batteriche ed eucariotiche.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• In base all'immunogeno (regione C-terminale aa 593-792), si prevede che l'anticorpo riconosca la proteina RRM1 a lunghezza intera (~90 kDa) e possa rilevare isoforme o prodotti di clivaggio; includere marcatori di peso molecolare e controlli appropriati.
• Per il Western blot, utilizzare condizioni ottimizzate di caricamento e trasferimento per bersagli ad alto peso molecolare; valutare la chemiluminescenza potenziata e tempi di esposizione prolungati.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, prevedere una localizzazione citoplasmatica; fissare e permeabilizzare adeguatamente le cellule (ad esempio, PFA al 4% seguito da permeabilizzazione con Triton X-100) per garantire l'accesso dell'anticorpo.
• Per l'immunoprecipitazione, verificare la compatibilità con il tampone di lisi e le condizioni di eluizione; utilizzare un lisato di controllo positivo (ad esempio, HeLa o HEK293) per verificare l'efficienza di cattura.
• L'anticorpo mostra reattività con uomo e topo; per l'analisi di altre specie, validare la reattività crociata a causa della potenziale divergenza di sequenza nell'epitopo bersaglio.

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