Anticorpo policlonale anti-Rubicon da coniglio per WB, ELISA - Q92622

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Rubicon

• Rubicon (proteina contenente il dominio Run che interagisce con Beclin-1 e dominio ricco di cisteine), nota anche come Baron, è codificata dal gene RUBCN (KIAA0226). Lo splicing alternativo produce molteplici isoforme.
• Rubicon funziona come inibitore centrale dell'autofagia e del traffico endosomiale: sopprime l'attività di PIK3C3, altera la funzione del complesso PI3KC3-C2, blocca la maturazione degli autofagosomi e previene l'attivazione di Rab7 dipendente da UVRAG sugli endosomi. Riferimenti correlati: PMID:20974968 PMID:21062745
• Nei macrofagi attivati, Rubicon promuove le risposte antibatteriche stabilizzando il complesso NADPH ossidasi CYBA:CYBB, aumentando la produzione di ROS dipendente da TLR2 e l'uccisione fagocitaria. Riferimenti correlati: PMID:22423966
• Dopo un'infezione fungina o virale, Rubicon regola negativamente la produzione di citochine pro-infiammatorie legandosi a CARD9 e sequestrandolo dai complessi di segnalazione. Riferimenti correlati: PMID:22423967
• Subcellularemente, Rubicon si localizza nei endosomi tardivi, lisosomi e endosomi precoci, in coerenza con il suo ruolo nel traffico endocitico e nella regolazione degli autofagosomi.
• La proteina contiene siti di fosforilazione ed è soggetta a modifiche post-traduzionali; è implicata nelle vie di neurodegenerazione e identificata in studi di proteomica.
• Peso molecolare previsto di 108,6 kDa; migrazione sperimentale a circa 109 kDa su SDS-PAGE.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde al dominio N-terminale (amminoacidi 1-200), che può rilevare tutte le isoforme conosciute. Verificare la specificità nei lisati cellulari e tissutali pertinenti.
• Per il Western blotting, si consiglia l'uso di SDS-PAGE riducente e membrana di nitrocellulosa; la banda attesa è di ~109 kDa.
• Le concentrazioni di lavoro ottimali devono essere determinate sperimentalmente; le diluizioni iniziali tipiche per anticorpi policlonali in WB variano da 1:500 a 1:2000.
• L'anticorpo presenta reattività crociata con la Rubicon di topo e ratto, quindi è adatto per studi comparativi in modelli roditori.
• Per ELISA, si consiglia di utilizzare l'immunogeno ricombinante come controllo positivo e titolare l'anticorpo di conseguenza.
• Convalidare l'anticorpo nel vostro sistema sperimentale specifico utilizzando controlli positivi e negativi (ad es. lisati di knockdown o knockout di RUBCN).

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