Anticorpo monoclonale coniglio anti-RXRα per WB, IP, IF/ICC, ChIP, ChIP-seq, ELISA - P19793

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RXRα

• RXRα (recettore dell'acido retinoico RXR-alfa) è un recettore nucleare codificato dal gene RXRA, designato anche come NR2B1. Appartiene alla superfamiglia dei recettori nucleari e funziona come fattore di trascrizione dipendente da ligando che lega l'acido 9-cis retinoico con alta affinità. PubMed:1310260 Riferimenti correlati: PMID:1310260

• Nel nucleo, RXRα forma eterodimeri con i recettori dell'acido retinoico (RAR) e si lega agli elementi di risposta all'acido retinoico (RARE) composti da siti tandem 5'-AGGTCA-3' (DR1-DR5). In assenza di ligando, gli eterodimeri RXR-RAR reclutano complessi correpressori che promuovono la deacetilazione degli istoni e la condensazione della cromatina, reprimendo la trascrizione. Il legame del ligando innesca la dissociazione del correpressore e il reclutamento di coattivatori, portando all'attivazione trascrizionale. PubMed:10195690, PubMed:11162439, PubMed:11915042, PubMed:20215566, PubMed:37478846, PubMed:9267036 Riferimenti correlati: PMID:10195690 PMID:11162439 PMID:11915042 PMID:20215566 PMID:37478846 PMID:9267036

• RXRα funge da partner eterodimerico comune per numerosi altri recettori nucleari, tra cui PPARα. L'eterodimero RXRA/PPARA è essenziale per l'attività trascrizionale di PPARα sui geni dell'ossidazione degli acidi grassi come ACOX1 e sui geni del sistema del citocromo P450. PubMed:10195690, PubMed:11915042, PubMed:28167758 Riferimenti correlati: PMID:10195690 PMID:11915042 PMID:28167758

• La localizzazione subcellulare include il nucleo, dove esercita le sue funzioni di regolazione trascrizionale, oltre al citoplasma e ai mitocondri. Il suo trasporto nucleo-citoplasmatico può facilitare l'importazione nucleare di partner di eterodimerizzazione come VDR e NR4A1. PubMed:12145331, PubMed:15509776 Riferimenti correlati: PMID:12145331 PMID:15509776

• RXRα subisce molteplici modifiche post-traduzionali tra cui acetilazione, fosforilazione e ubiquitinazione (formazione del legame isopeptidico). Queste modifiche regolano la sua stabilità, l'affinità di legame al DNA e l'attività trascrizionale. Parole chiave: Acetilazione, Fosfoproteina, Coniugazione Ubl, Legame isopeptidico.

• Oltre alla regolazione metabolica, RXRα svolge un ruolo nell'immunità innata regolando negativamente i geni antivirali come l'IFN di tipo I, attenuando così le risposte immunitarie durante l'infezione virale. Promuove anche la fagocitosi dei detriti di mielina e la rimielinizzazione nei macrofagi. PubMed:25417649, PubMed:26463675 Riferimenti correlati: PMID:25417649 PMID:26463675

• L'espressione tissutale è ampia: altamente espresso nel fegato, rene e cervello; rilevato anche nei fibroblasti polmonari e nei monociti. Il suo ruolo nella senescenza cellulare è legato alla repressione di ITPR2 e alla regolazione della segnalazione del calcio. PubMed:30216632, PubMed:26463675, PubMed:14702039, PubMed:2159111, PubMed:24275569 Riferimenti correlati: PMID:30216632 PMID:26463675 PMID:14702039 PMID:2159111 PMID:24275569

• L'eterodimero RXRα/RARB può agire sia come reprimente trascrizionale sia come attivatore a seconda del contesto dell'elemento DNA RARE, evidenziando il suo ruolo versatile nella regolazione genica. PubMed:29021580 Riferimenti correlati: PMID:29021580

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa 1-100) di RXRα umano, un dominio coinvolto nella transattivazione dipendente da ligando e possibilmente nelle interazioni con i coregolatori. Questa strategia di progettazione può conferire elevata specificità e affinità sia per le forme non modificate sia per quelle post-traduzionalmente modificate del recettore.

• L'anticorpo è validato per Western blotting (WB) per rilevare una banda a 51 kDa. Data l'espressione ubiquitaria di RXRα nel fegato, rene e cervello, questi tessuti rappresentano controlli positivi adatti. Per l'immunoprecipitazione (IP), si consiglia l'uso di estratti nucleari da cellule in coltura o campioni tissutali.

• Nell'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) e nel ChIP-seq, RXRα viene reclutato sui RARE a livello dell'intero genoma. Un locus di controllo positivo ben caratterizzato è il gene del recettore beta dell'acido retinoico (RARB), che contiene un RARE DR5 canonico. Per ottenere risultati ottimali, trattare le cellule con acido 9-cis retinoico o acido all-trans retinoico prima della reticolazione.

• Per l'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), l'anticorpo può essere utilizzato per monitorare la traslocazione nucleare di RXRα dopo stimolazione con ligando. La co-colorazione con un marcatore nucleare o marcatori di organelli (ad esempio, un colorante mitocondriale) può fornire ulteriori informazioni sul contesto di localizzazione.

• Quando si esegue un ELISA sandwich, l'abbinamento di questo anticorpo monoclonale con un anticorpo di rilevazione policlonale targeting un epitopo distinto può aumentare la sensibilità. Validare il saggio utilizzando standard di proteina RXRα ricombinante e verificare la reattività crociata con altre isoforme di RXR (RXRβ, RXRγ) se necessario.

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