Anticorpo policlonale coniglio anti-S100A8 per WB, IHC-P, ELISA - P27005

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di S100A8

• S100A8 è una piccola proteina legante il calcio e lo zinco (10295 Da) appartenente alla famiglia S100, nota anche come calgranulina-A, MRP-8, p8 e CP-10.
• Gioca un ruolo prominente nella regolazione dei processi infiammatori e delle risposte immunitarie innate, principalmente inducendo la chemiotassi e l'adesione dei neutrofili.
• A livello intracellulare, come parte del complesso S100A8/A9 (calprotectina), facilita il traffico dell'acido arachidonico dei leucociti, modula la riorganizzazione del citoscheletro dipendente dalla tubulina durante la migrazione dei fagociti e attiva il NADPH-ossidasi promuovendo l'assemblaggio del complesso enzimatico e trasferendo l'acido arachidonico al complesso.
• A livello extracellulare, S100A8 agisce come allarme o molecola DAMP, legandosi a recettori di riconoscimento dei pattern come TLR4 e AGER, che innescano la segnalazione delle chinasi MAP e NF-κB per amplificare le cascate pro-infiammatorie; possiede anche attività antimicrobica diretta tramite chelazione dello Zn²⁺.
• La proteina può indurre la morte cellulare attraverso autofagia e apoptosi tramite cross-talk tra mitocondri e lisosomi che coinvolge ROS e BNIP3, e regola la sopravvivenza dei neutrofili attraverso le vie MEK-ERK mediate da ITGAM/ITGB e TLR4.
• Secondo le parole chiave di UniProt e i dati funzionali, S100A8 è coinvolto in eventi di S-nitrosilazione come parte del complesso transnitrosilasi iNOS-S100A8/A9, contribuendo alla modifica selettiva del sito delle proteine bersaglio.
• A livello subcellulare, S100A8 si trova nel citoplasma, associata al citoscheletro, alla membrana cellulare, ed è anche secreta nello spazio extracellulare.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato era una proteina ricombinante che copre gli aminoacidi 1-89 di S100A8 di topo (NP_038678.1). Poiché questa sequenza corrisponde alla quasi intera proteina a lunghezza intera (peso molecolare previsto ~10 kDa), l'anticorpo dovrebbe riconoscere la forma nativa. Per il Western blot, prevedere una banda intorno a 10–12 kDa; la riduzione e la denaturazione possono aiutare a esporre completamente l'epitopo.
• Essendo un anticorpo policlonale, potrebbe presentare lievi variazioni da lotto a lotto; considerare la convalida delle prestazioni con un controllo positivo noto come lisato di midollo osseo o milza di topo, o cellule stimolate per esprimere S100A8 (es. macrofagi trattati con LPS).
• Per immunochimica (IHC-P), le condizioni di recupero dell'antigene (es. tampone citrato pH 6.0 con recupero dell'epitopo indotto dal calore) dovrebbero essere ottimizzate e potrebbe essere necessaria l'inibizione della perossidasi endogena. Verificare la reattività crociata con i tessuti di ratto come indicato.
• Nelle applicazioni ELISA, rivestire con S100A8 ricombinante o utilizzare un formato sandwich con una coppia di anticorpi abbinata; confermare la specificità con i controlli negativi pertinenti.

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