Anticorpo Monoclonale Anti-SARS-CoV-2 3CLpro per WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Glicoproteina Spike

• La glicoproteina spike (S) è una proteina di fusione di classe I trimerica che media l'ingresso virale legandosi al recettore ospite dell'enzima di conversione dell'angiotensina 2 (ACE2) (PubMed:32142651, PubMed:32155444, PubMed:33607086). Riferimenti correlati: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Dopo il legame al recettore, la proteina S subisce un taglio proteolitico nel sito S2' da parte di proteasi ospiti come TMPRSS2 o catepsina L, innescando cambiamenti conformazionali irreversibili che guidano la fusione di membrana (PubMed:32142651, PubMed:32703818, PubMed:34159616, PubMed:34561887). Riferimenti correlati: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• La proteina spike è anche in grado di utilizzare recettori alternativi per l'ingresso, inclusi neuropilina-1 (NRP1) e neuropilina-2 (NRP2), che possono contribuire all'infezione delle cellule epiteliali olfattive con bassa espressione di ACE2 (PubMed:33082294, PubMed:33082293). Riferimenti correlati: PMID:33082294 PMID:33082293
• Inoltre, il recettore dell'asialoglicoproteina 1 (ASGR1) può fungere da recettore alternativo in modo indipendente da ACE2 (PubMed:34837059). Riferimenti correlati: PMID:34837059
• La proteina S si localizza sulla membrana del virione e si trova anche nel compartimento intermedio dell'apparato di Golgi del reticolo endoplasmatico ospite (ERGIC) e sulla membrana cellulare ospite durante l'infezione.
• Contiene due regioni con ripetizioni eptadiche (HR1 e HR2) che formano una struttura a fascio a sei eliche critica per la fusione di membrana, e la proteina è pesantemente glicosilata con multipli ponti disolfuro e siti di palmitoilazione.
• La proteina spike agisce anche come superantigene e inibisce le risposte immunitarie innate dell'ospite, incluso l'antagonismo della tetherina, contribuendo all'evasione immunitaria.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per il Western blot (WB), si può osservare una banda a ~34 kDa (monomero 3CLpro); considerare l'uso di inibitori delle proteasi durante la preparazione del campione per prevenire la degradazione della proteasi virale.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), assicurare una corretta fissazione e permeabilizzazione per il rilevamento della 3CLpro citoplasmatica in cellule infettate da SARS-CoV-2; validare in linee cellulari di controllo positivo appropriate.
• Le applicazioni ELISA possono richiedere la titolazione dell'anticorpo e dell'antigene ricombinante 3CLpro; considerare un formato ELISA sandwich per un'elevata sensibilità.
• A causa della conservazione della sequenza, non si può escludere una reattività crociata con la 3CLpro di altri coronavirus; verificare la specificità nel sistema di campioni rilevante.

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