Anticorpo policlonale Anti-SARS-CoV-2 3CLpro per WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della 3CLpro di SARS-CoV-2

• La glicoproteina Spike (S) è una proteina di fusione virale di classe I che media l'ingresso di SARS-CoV-2 nelle cellule ospiti. Viene sintetizzata come precursore e tagliata proteoliticamente nelle subunità S1 e S2.
• La subunità S1 contiene il dominio di legame al recettore (RBD) che si lega al recettore umano ACE2 (angiotensina convertendo enzima 2) per facilitare l'attaccamento del virus alle cellule ospiti. Riferimenti correlati: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Le vie di ingresso alternative utilizzano neuropilina-1 (NRP1), NRP2, integrine o ASGR1, che possono contribuire al tropismo tissutale, in particolare nelle cellule epiteliali olfattive che esprimono bassi livelli di ACE2. Riferimenti correlati: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• La subunità S2 media la fusione delle membrane tramite un riarrangiamento conformazionale dipendente da cerniera, passando dallo stato di pre-fusione a quello di post-fusione a forcina, e richiede il taglio nel sito S2' da parte di proteasi ospiti come TMPRSS2 o catepsina L. Riferimenti correlati: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Il dominio stelo della proteina S contiene tre cerniere, che conferiscono alla testa di legame al recettore una notevole libertà di orientamento, cosa che può facilitare l'evasione immunitaria. Riferimenti correlati: PMID:32817270
• La localizzazione subcellulare comprende la membrana del virione, la membrana del compartimento intermedio reticolo endoplasmatico–apparato di Golgi (ERGIC) dell'ospite e la membrana della cellula ospite, in linea con i suoi ruoli nell'assemblaggio, nell'uscita e nell'ingresso del virus.
• La proteina è fortemente glicosilata e contiene legami disolfuro conservati, regioni a spirale avvolte e domini transmembrana; presenta anche proprietà superantigeniche e contribuisce all'evasione immunitaria.
• Il suo peso molecolare è di circa 141 kDa ed è un bersaglio chiave per anticorpi neutralizzanti, test diagnostici e lo sviluppo di vaccini.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Dato che l'immunogeno è un frammento ricombinante di 3CLpro (amminoacidi 1-306), utilizzare controlli positivi appropriati come lisati di cellule infettate da SARS-CoV-2 o 3CLpro ricombinante purificata per convalidare la specificità.
• Per il Western blotting, ottimizzare le condizioni di blocco e di diluizione dell'anticorpo; ci si aspetta una banda a circa 34 kDa (3CLpro full-length), ma il fornitore segnala una banda a 141 kDa (probabilmente corrispondente alla proteina Spike). Verificare la banda rilevata con marcatori di peso molecolare e antigeni di controllo appropriati.
• Negli esperimenti di immunofluorescenza/ICC, includere passaggi di permeabilizzazione per la rilevazione della proteasi intracellulare e una controcolorazione con marcatori di organelli per valutare la localizzazione subcellulare.
• Per ELISA, la natura policlonale permette l'utilizzo sia come anticorpo di cattura che di rilevazione nei formati sandwich. Abbinare l'anticorpo a anticorpi monoclonali diretti contro epitopi distinti per migliorare la specificità e il rapporto segnale/rumore.
• Considerare la possibile reattività crociata con la 3CLpro di altri coronavirus; gli allineamenti di sequenza e i saggi di inibizione competitiva possono aiutare a confermare la specificità.
• Convalidare sempre l'anticorpo nel vostro sistema sperimentale specifico, poiché le prestazioni possono variare in base al tipo di campione e ai metodi di fissazione.

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