Anticorpo policlonale di coniglio anti-SARS-CoV-2 NSP12 per WB, ELISA - P0DTD1

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NSP12 di SARS-CoV-2

• NSP12 è l'RNA polimerasi diretta dall'RNA (RdRp) che catalizza la trascrizione degli RNA genomici e subgenomici virali, essenziale per la replicazione di SARS-CoV-2. Riferimenti correlati: PMID:32277040 PMID:32358203 PMID:32438371
• Insieme alle proteine accessorie nsp7 e nsp8, NSP12 forma un complesso di replicazione altamente processivo necessario per una sintesi efficiente dell'RNA. Riferimenti correlati: PMID:32277040 PMID:32358203 PMID:32438371
• Il dominio NiRAN simile a chinasi di NSP12 attacca uno o più nucleotidi all'N-terminale di NSP9, creando un primer RNA-proteina covalente per l'inizio della trascrizione. Riferimenti correlati: PMID:37794589
• NSP12 esegue la trascrizione discontinua fermandosi alle sequenze regolatrici della trascrizione (TRS) e saltando alla TRS del leader, portando alla produzione di mRNA subgenomici. Riferimenti correlati: PMID:35706445
• NSP12 è una subunità dell'enzima virale di cappatura dell'RNA e catalizza la reazione di guanililtransferasi formando la struttura centrale della cappuccio GpppA-RNA, fondamentale per la stabilità dell'mRNA e l'evasione immunitaria. Riferimenti correlati: PMID:35944563
• Subcellolarmente, NSP12 si localizza prevalentemente nel citoplasma dell'ospite e viene reclutato nelle vesciche a doppia membrana e nei complessi di replicazione perinucleari derivati dal reticolo endoplasmatico.
• Come attore centrale nella replicazione dei coronavirus, NSP12 è il bersaglio dei principali farmaci antivirali come remdesivir e molnupiravir.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Per il Western blotting, tieni conto che l'anticorpo può rilevare sia la precursore della poliproteina replicasi intera (~794 kDa) sia la NSP12 matura dopo il processamento proteolitico. Si consiglia di convalidare la rilevazione in lisati cellulari infettati da SARS-CoV-2 o in sistemi che esprimono NSP12 ricombinante.
• Nelle applicazioni ELISA, la natura policlonale può aumentare la sensibilità; tuttavia, la reattività incrociata con proteine non correlate o altri coronavirus deve essere esclusa utilizzando controlli appropriati.
• Poiché l'immunogeno è un peptide sintetico (amminoacidi 200–300 di NSP12), conferma che l'epitopo rimanga accessibile nelle condizioni del tuo test (denaturato vs nativo).
• Per la rilevazione intracellulare tramite immunofluorescenza, considera che NSP12 è associato ai complessi di replicazione virali sulle membrane dell'ospite; la fissazione/permeabilizzazione potrebbe richiedere ottimizzazione.

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