Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-SARS-CoV-2 NSP15 per WB, ELISA - P0DTD1

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NSP15

• NSP15 è codificata dal gene rep di SARS-CoV-2 come parte della grande poliproteina ORF1ab (nota anche come poliproteina replicasi 1ab), che viene processata proteoliticamente in multiple proteine non strutturali (NSP) essenziali per il ciclo vitale del virus.
• NSP15 funziona come un'endoribonucleasi specifica per l'uridilato (EndoU) che svolge un ruolo fondamentale nella trascrizione e replicazione virale degradando i 5'-poliuridinati generati durante la replicazione della regione poli(A) degli RNA genomici e subgenomici virali. Questa attività previene l'accumulo di RNA poli(U) che altrimenti si ibriderebbe con le code poli(A) e attiverebbe i sensori di dsRNA dell'ospite, evitando così il rilevamento immunitario innato. Riferimenti correlati: PMID:33504779 PMID:33564093
• L'attività endonucleasica di NSP15 previene l'attivazione simultanea dei sensori di dsRNA della cellula ospite, inclusi MDA5/IFIH1, OAS e PKR, facilitando l'evasione immunitaria.
• È stato dimostrato che NSP15 si lega al dsRNA genomico in associazione con il complesso di replicazione-trascrizione (RTC) e potrebbe anche contribuire alla trascrizione discontinua da parte di nsp12. Riferimenti correlati: PMID:34562452 PMID:35706445
• NSP15 catalizza una reazione in due fasi: transesterificazione 2'-O che genera un fosfato ciclico 2',3', seguita da idrolisi a un 3'-fosfato. Riferimenti correlati: PMID:33504779 PMID:33564093
• Come componente della poliproteina replicasi, NSP15 si localizza negli organelli di replicazione citoplasmatici dell'ospite, inclusi vescicole a doppia membra derivanti dal reticolo endoplasmatico, dove avviene la sintesi dell'RNA virale (per somiglianza, basato su parole chiave di localizzazione della poliproteina).
• La proteina NSP15 è conservata tra i coronavirus ed è considerata un bersaglio antivirale attraente a causa dei suoi ruoli nella replicazione virale e nell'evasione immunitaria.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde a un peptide sintetico all'interno della regione NSP15 (amminoacidi 6600-6700 di YP_009724389.1); pertanto, si prevede che l'anticorpo riconosca NSP15, ma potrebbe anche rilevare la poliproteina ORF1ab non processata in lisati di cellule infette. Per il Western blot (WB), considerare l'uso di lisati da cellule infettate da SARS-CoV-2 e validare il pattern delle bande con controlli appropriati.
• Per l'ELISA, immobilizzare la proteina NSP15 ricombinante o il peptide immunizzante, e ottimizzare le condizioni di rivestimento e le diluizioni dell'anticorpo. Poiché si tratta di un anticorpo policlonale, la consistenza da lotto a lotto dovrebbe essere verificata.
• La reattività incrociata con altri coronavirus o proteine dell'ospite non è stata testata; validare nel vostro specifico sistema sperimentale se necessario.

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