Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Spike SARS-CoV-2 per WB - P0DTC2

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Spike SARS-CoV-2

• La glicoproteina Spike (S) di SARS-CoV-2, nota anche come proteina E2 o peplomero, è una proteina di fusione virale di classe I che media l'ingresso del virus nelle cellule ospiti ed è un bersaglio primario per gli anticorpi neutralizzanti.
• La proteina S lega il virione alla cellula ospite legandosi al recettore dell'enzima di conversione dell'angiotensina 2 (ACE2), avviando l'infezione.
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  PMID:33607086
• Recettori di ingresso alternativi includono neuropilina-1/2 (NRP1/NRP2) e integrina, che contribuiscono al tropismo tissutale; ad esempio, l'uso di NRP1/NRP2 spiega il tropismo virale nelle cellule epiteliali olfattive con bassa espressione di ACE2.
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  PMID:33082293
  PMID:35150743
• Il precursore a lunghezza intera della spike (~141 kDa) viene processato proteoliticamente nelle subunità S1 e S2. Dopo il legame al recettore, il taglio in S2′ da parte di proteasi ospiti come TMPRSS2 o catepsina L innesca cambiamenti conformazionali irreversibili che fondono le membrane virale e cellulare.
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  PMID:34561887
• La proteina S si localizza sulla membrana del virione, sulla membrana del compartimento intermedio reticolo endoplasmatico–Golgi (ERGIC) dell'ospite e sulla membrana cellulare dell'ospite.
• Caratteristiche strutturali chiave includono glicosilazione N‑legata, palmitoilazione, un'ancora transmembrana e ripetizioni eptadiche a spirale stabilizzate da ponti disolfuro.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Il peptide immunogeno (amminoacidi 600–700) comprende la giunzione S1/S2; pertanto, l'anticorpo può rilevare sia la spike a lunghezza intera (~141 kDa) che la subunità S2 in condizioni riducenti. Valutare l'utilizzo di SDS‑PAGE sia riducente che non riducente per il Western blot.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), le condizioni di fissazione e permeabilizzazione dovrebbero essere ottimizzate per la linea cellulare o il tessuto bersaglio, poiché la localizzazione della spike (superficiale vs. intracellulare) dipende dal contesto di espressione.
• In ELISA, questo anticorpo può essere valutato come reagente di cattura o di rilevamento; l'abbinamento con un anticorpo monoclonale anti-spike può migliorare la specificità del saggio.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), convalidare la capacità dell'anticorpo di isolare complessi spike nativi nel sistema campione rilevante, poiché l'integrità conformazionale può influenzare il legame.
• Il Dot blot (DB) può servire come strumento di screening rapido; tuttavia, la sensibilità dovrebbe essere confrontata con metodi quantitativi come l'ELISA per analisi definitive.
• La reattività incrociata è confermata per SARS‑CoV‑2; la reattività con proteine spike di altri coronavirus (es. SARS‑CoV, MERS‑CoV) non è determinata e dovrebbe essere testata se necessario.

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