Anticorpo policlonale di coniglio Anti-SARS-CoV-2 Spike S2 ECD per WB, DB, IF/ICC, IP e ELISA - P0DTC2

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della glicoproteina Spike (S)

• La glicoproteina spike (S) è una proteina di fusione virale di classe I che viene clivata nelle subunità S1 e S2. S1 contiene il dominio di legame al recettore, mentre S2 ancora la proteina e realizza la fusione della membrana.
• S1 si lega al recettore ospite ACE2 per avviare l'infezione. Recettori di ingresso alternativi sono la neuropilina-1 (NRP1), la neuropilina-2 (NRP2), le integrine e il recettore 1 per l'asialoglicoproteina (ASGR1), che possono contribuire al tropismo di SARS-CoV-2 nelle cellule con bassa espressione di ACE2.
  Riferimenti correlati:
  PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086, PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• La scissione proteolitica di S2 nel sito S2' da parte della TMPRSS2 ospite (superficie cellulare) o della catepsina L (endosomiale) innesca cambiamenti conformazionali irreversibili che portano alla fusione dell'involucro virale con la membrana ospite, rilasciando il genoma virale nel citoplasma.
  Riferimenti correlati:
  PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• La subunità S2 contiene regioni ripetute eptadiche (HR1 e HR2) che si ripiegano in un fascio a sei eliche, avvicinando le membrane virali e cellulari per la fusione.
• Subcellularmente, la proteina spike si localizza sulla membrana del virione, nel compartimento intermedio ER-Golgi ospite (ERGIC) e sulla membrana plasmatica della cellula ospite.
• Spike è ampiamente N-glicosilato e palmitoilato, contiene legami disolfuro e funziona come superantigene; sopprime anche le risposte immunitarie innate dell'ospite e contrasta la tetherina.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno copre il dominio extracellulare S2 (aa 686-1214), includendo elementi funzionali conservati come il peptide di fusione e le ripetizioni eptadiche. Questo progetto permette di rilevare S2 anche dopo la perdita di S1.
• Per Western blot, la proteina spike full-length migra a ~141 kDa in condizioni riducenti; per la S2 clivata può essere osservata una banda di ~70-80 kDa. Validare le condizioni di lisi e preparazione del campione.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, includere un passaggio di permeabilizzazione per rilevare la spike localizzata nei compartimenti intracellulari (ERGIC) oltre che sulla membrana plasmatica.
• Per ELISA di cattura, si consiglia di abbinare questo pAb con un anticorpo monoclonale contro la subunità S1 per misurare specificamente la spike full-length, o utilizzarlo come reagente di rilevamento per quantificare i livelli di S2.
• Il dot blot (DB) può essere utilizzato per lo screening rapido dell'espressione antigenica in lisati cellulari o proteine ricombinanti; ottimizzare la concentrazione dell'antigene e le condizioni del tampone.
• L'immunoprecipitazione (IP) può catturare i complessi della spike; includere controlli negativi appropriati per valutare il legame non specifico.

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