Anticorpo policlonale Anti-SARS-CoV-2 Spike S2 per WB, IP, ELISA - P0DTC2

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della glicoproteina Spike (Subunità S2)

• La glicoproteina spike (S) è una proteina di fusione virale di classe I e l'antigene di superficie principale del SARS-CoV-2. Media l'attacco iniziale alle cellule ospiti tramite il legame del dominio di legame del recettore (RBD) nella subunità S1 al recettore dell'enzima di conversione dell'angiotensina 2 (ACE2). Riferimenti correlati: PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Dopo il legame al recettore, la proteina S viene scissa proteoliticamente nel sito S2′ da proteasi ospiti come la proteasi transmembrana serina 2 (TMPRSS2) o la catepsina L, innescando riarrangiamenti conformazionali nella subunità S2 che guidano la fusione dell'involucro virale con la membrana della cellula ospite. Riferimenti correlati: PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• Il virus può anche impiegare recettori di ingresso alternativi, inclusi la neuropilina-1 (NRP1) e la neuropilina-2 (NRP2), che sono altamente espresse nelle cellule dell'epitelio olfattivo e potrebbero spiegare i sintomi di anosmia; le integrine; e il recettore 1 delle asialoglicoproteine (ASGR1) in modo indipendente dall'ACE2. Riferimenti correlati: PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Localizzazione subcellulare: La proteina S è presente sulla membrana del virione e transita attraverso la membrana del compartimento intermedio tra reticolo endoplasmatico e apparato di Golgi (ERGIC) dell'ospite; la fusione avviene sulla membrana della cellula ospite o all'interno degli endosomi.
• Le modifiche post-traduzionali includono un'ampia glicosilazione N-legata, legami disolfuro, palmitoilazione e clivaggio nelle subunità S1 e S2. Parole chiave da UniProt: proteina dell'involucro virale, transmembrana, glicoproteina, interazione ospite-virus, immunoevasione virale, superantigene e inibizione dell'immunità innata dell'ospite.
• Il dominio del gambo (stalk) della proteina S contiene tre cerniere flessibili che consentono una notevole libertà orientazionale della testa di legame del recettore, una caratteristica critica per l'evasione immunitaria e il coinvolgimento del recettore. Riferimenti correlati: PMID:32817270

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 1174–1273 della subunità S2 (basato sulla sequenza di riferimento YP_009724390.1). Si prevede che l'anticorpo riconosca sia la proteina spike a lunghezza intera (~141 kDa) sia il frammento di clivaggio S2.
• Per il Western blotting, utilizzare condizioni SDS-PAGE riducenti. Dovrebbe essere osservata una banda corrispondente alla spike a lunghezza intera a circa 141 kDa; potrebbero anche apparire bande a basso peso molecolare che rappresentano i prodotti di clivaggio S2. In condizioni non riducenti, è possibile rilevare oligomeri di ordine superiore (trimeri).
• Includere controlli positivi appropriati, come lisati di cellule infette da SARS-CoV-2 o proteina spike ricombinante. Si consiglia un controllo di carico (es. GAPDH, β-actina).
• Per l'immunoprecipitazione, considerare l'uso di perle di proteina A/G pre-accoppiate con l'anticorpo per ridurre al minimo il rilevamento delle bande della catena pesante.
• Nell'ELISA, questo anticorpo policlonale può fungere da reagente di cattura o rilevamento in saggi a sandwich per la quantificazione della proteina spike. Ottimizzare le concentrazioni di rivestimento e i tamponi di blocco per il formato specifico della piastra.

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