Anticorpo policlonale di coniglio anti-SEC61B per WB, IF/ICC, ELISA - P60468

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di SEC61B

• SEC61B codifica la subunità beta del complesso del traslocone SEC61, un componente centrale del meccanismo di traslocazione delle proteine nel reticolo endoplasmatico (RE). Riferimenti correlati: PMID:12475939
• Il complesso SEC61 forma un recettore per i ribosomi e un poro regolato nella membrana del RE, consentendo l'importazione cotraduzionale di polipeptidi precursori contenenti peptidi segnale. Riferimenti correlati: PMID:12475939
• Media inoltre l'inserimento nella membrana del RE delle proteine transmembrana, agendo insieme al complesso del traslocone multipass (MPT) per le proteine di membrana multipass. Riferimenti correlati: PMID:32820719, PMID:36261522
• SEC61B coopera con la proteina traslocante TRAM1 per facilitare l'importazione delle proteine nascenti nel RE. Riferimenti correlati: PMID:19121997
• A livello subcellulare, SEC61B è un componente integrale della membrana del reticolo endoplasmatico.
• La proteina subisce diverse modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione, palmitoilazione e fosforilazione, che possono regolarne l'attività o la stabilità.
• In quanto elemento chiave della traslocazione delle proteine, SEC61B è associata a processi quali il trasporto delle proteine, la traslocazione e l'organizzazione della membrana del RE.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per il Western Blot (WB), il peso molecolare previsto di SEC61B è di circa 10 kDa. Utilizzare un gel SDS-PAGE al 12-15% e ottimizzare il trasferimento su una membrana PVDF con pori da 0,2 µm per le proteine di piccole dimensioni. Includere controlli positivi appropriati, come lisati di HeLa, HEK293 o tessuti che esprimono SEC61B, e convalidare la specificità dell'anticorpo utilizzando un peptide bloccante o un campione knockout.
• Per l'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), si raccomanda la fissazione con PFA al 4% seguita dalla permeabilizzazione con Triton X-100 allo 0,1%. Testare la concentrazione dell'anticorpo nell'intervallo 1:50–1:200 e confermare la localizzazione nel RE. La co-colorazione con un marcatore del RE, come calnexina o PDI, può aiutare a verificare la specificità.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere valutato come reagente di cattura o di rilevazione. Titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione di lavoro ottimale e convalidarlo utilizzando una proteina SEC61B ricombinante o un lisato cellulare. Assicurarsi di testare la reattività crociata con campioni di topo e ratto per confermare le prestazioni.
• Essendo un anticorpo policlonale, è necessario monitorare la coerenza tra i diversi lotti. Valutare la possibilità di aliquotarlo al momento della ricezione ed eseguire uno studio pilota per ogni nuovo lotto al fine di mantenere la riproducibilità sperimentale.

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